Cdc25A反義寡核苷酸對人食管鱗癌EC9706細胞增殖的影響.pdf

1、背景與目的:
　　我國是食管癌的高發(fā)國家，發(fā)病率和死亡率位于世界首位，河南省是食管癌的高發(fā)省份，同時也是造成當?shù)匕┌Y死亡的主要原因。目前的治療方法效果均不甚滿意，并且存在一定的局限性。尋找導致食管癌惡性增殖的分子靶點并對其靶向治療成為近年來食管癌治療研究的熱點之一。
　　在哺乳動物細胞中存在3種Cdc25同源基因，其中Cdc25A是一個促進細胞由G1期進入到S期必須的細胞周期調(diào)控磷酸酶，能夠?qū)⒓毎芷诘鞍滓蕾囆约っ福╟ycl

2、in-dependentkinase，CDK）蘇氨酸、酪氨酸殘基抑制性磷酸化，在細胞周期調(diào)控中發(fā)揮重要作用。已有報道表明在肝癌、乳腺癌、宮頸癌、胃癌等一些常見腫瘤中Cdc25A表達水平顯著增高，但有關(guān)Cdc25A表達在食管癌發(fā)生、發(fā)展中的作用尚未見文獻報道。
　　為探討Cdc25A基因的異常表達在食管癌發(fā)生和發(fā)展中的作用，本研究采用Cdc25A反義寡聚核苷酸(antisenseoligonucleotide，ASODN)處理食管癌

3、EC9706細胞，采用免疫細胞化學技術(shù)檢測細胞中Cdc25A、CDK2、cyclinE蛋白的表達，采用原位雜交技術(shù)檢測細胞中Cdc25A、CDK2、cyclinE的mRNA的表達。運用CCK-8試劑盒檢測細胞的增殖情況。
　　方法:
　　1.設(shè)計合成Cdc25A反義寡核苷酸(Cdc25AASODN)、無關(guān)寡核苷酸序列(Cdc25AN-ODN)，分別用不同濃度(5μmol/ml、10μmol/ml、15μmol/ml)的Cdc

4、25AASODN和Cdc25AN-ODN轉(zhuǎn)染EC9706細胞24h、48h、72h。將脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的細胞作為空白對照組。
　　2.免疫細胞化學檢測不同濃度各組細胞中Cdc25A、cyclinE、CDK2的蛋白表達情況。
　　3.原位雜交檢測各組細胞中Cdc25A、cyclinE、CDK2的mRNA表達情況。
　　4.采用CCK-8試劑盒檢測轉(zhuǎn)染Cdc25AASODN和Cdc25AN-ODN后對食管癌EC9706細胞增殖能

5、力的影響。
　　5.使用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計學分析，檢驗水準為α=0.05。
　　結(jié)果:
　　1.與對照組比較ASODN組中Cdc25A蛋白和mRNA表達顯著降低(P＜0.05)，且有濃度依賴性和時間依賴性，Cdc25A的表達隨轉(zhuǎn)染濃度的增加以及時間的延長而減少。濃度為15μmol/mlCdc25AASODN作用72h效應最好。
　　2.ASODN組中cyclinE蛋白和mRNA表達較空白對照和N-ODN

6、組顯著降低(P＜0.05)，且隨著濃度或時間的增加而其表達隨之降低，在同一時間的不同濃度和同一濃度的不同時間均有顯著性差異(P＜0.05)。濃度為15μmol/mlCdc25AASODN作用72h時效應最好。
　　3.ASODN組中CDK2蛋白和mRNA表達較空白對照和N-ODN組顯著降低(P＜0.05)，且隨著濃度或時間的增加而其表達隨之降低，在同一時間的不同濃度和同一濃度的不同時間均有顯著性差異（P＜0.05）。濃度為15μm

7、ol/mlCdc25AASODN作用72h時效應最好。
　　4.N-ODN組和空白對照組EC9706細胞的增殖無明顯差異(P＞0.05)。ASODN組與N-ODN組和空白對照組相比存轉(zhuǎn)染2d細胞的增殖明顯受到抑制(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.Cdc25AASODN能特異性的抑制食管鱗癌EC9706細胞中Cdc25A蛋白和mRNA表達，同時下調(diào)cyclinE、CDK2蛋白和mRNA表達。
　　2.Cdc2