白藜蘆醇對培養(yǎng)海馬神經(jīng)元的突觸功能活動的調(diào)控作用.pdf

1、目的：
　　本研究在體外培養(yǎng)已形成突觸聯(lián)系的海馬神經(jīng)元上,應用全細胞電壓鉗技術(shù)記錄突觸后電流:微興奮性突觸后電流(mEPSC)、誘發(fā)興奮性突觸后電流(eEPSC)、微抑制性突觸后電流(mIPSC)和誘發(fā)抑制性突觸后電流(eIPSC),通過孵育或者灌流100μmol/L白藜蘆醇(resveratrol,Res)來探究其對神經(jīng)元之間突觸傳導的影響,進而對Res在神經(jīng)元損傷過程中所起的保護和修復作用機理提供可能解釋。
　　方法：<

2、br>　　1.體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元
　　在4℃Hanks平衡鹽溶液中迅速將4只C57BL/6乳鼠海馬組織取出,并用此溶液洗一遍后,用1ml0.25％胰蛋白酶-EDTA在37℃消化12min,然后用含有5%胎牛血清的Hanks平衡鹽溶液終止消化。將消化后的海馬組織移入貼壁培養(yǎng)基吹打15-20次后將細胞懸液滴在玻璃片上,37℃貼壁30min后加入1ml貼壁培養(yǎng)基。在培養(yǎng)第1天、第4天和第9天分別更換生長培養(yǎng)基,培養(yǎng)14d后進行全細胞電壓

3、鉗記錄實驗。
　　2.全細胞記錄
　　神經(jīng)元體外培養(yǎng)14天后,取出載有形成突觸聯(lián)系的海馬神經(jīng)元的玻璃片置于細胞外液中,分別灌流或者孵育酒精(對照組)或100μmol/LRes(實驗組),用膜片鉗記錄系統(tǒng)在電壓鉗模式下進行全細胞記錄。
　　3.數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學分析
　　原始數(shù)據(jù)首先用clampfit和Igor6.0進行處理,然后用GraphPadprism5統(tǒng)計軟件分析。實驗結(jié)果以`x±SEM表示,組間平均值用t檢

4、驗進行比較,P<0.05具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　1.Res對抑制性突觸傳導的影響進行mIPSC或eIPSC記錄時,在細胞外液中加入10μmol/LCNQX(AMPA受體阻斷劑)和1μmol/LTTX(Na+通道阻斷劑)。在此條件下,在灌流100μmol/LRes過程中,記錄的海馬神經(jīng)元mIPSC在每個時間段的幅值和頻率均無明顯變化(n=10,P>0.05);用100μmol/LRes孵育海馬神經(jīng)元前后,記錄的mIP

5、SC的幅值和頻率也沒有明顯變化(n=24,P>0.05);灌流100μmol/LRes對eIPSC的幅值和短時程可塑性也沒有明顯影響(n=10,P>0.05)。2.Res對興奮性突觸傳導的影響進行mEPSC或eEPSC記錄時,在細胞外液中加入PTX(GABA受體阻斷劑)和1μmol/LTTX。在此條件下,用100μmol/LRes孵育海馬神經(jīng)元前后,記錄的mEPSC的幅值和頻率均無明顯變化(n=24,P>0.05);記錄的eEPSC的幅