白藜蘆醇誘導(dǎo)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞的神經(jīng)元樣細(xì)胞分化及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究白藜蘆醇體外誘導(dǎo)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞(Marrowstroma cells，MSG)的神經(jīng)元樣細(xì)胞分化及其可能的機(jī)制。
　　方法:采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)MSCs;用含白藜蘆醇的無血清DMEM/F12誘導(dǎo)MSG分化。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，掃描電鏡檢測(cè)細(xì)胞表面的初級(jí)纖毛，免疫熒光法、免疫印跡法檢測(cè)nestin、NSE、MAP-2、GFAP、Ac-Tu、Ptc1、Smo和Gli1的表達(dá)。
　　結(jié)果:1.白藜蘆醇誘導(dǎo)后細(xì)

2、胞胞體收縮，伸出長(zhǎng)突起，類似神經(jīng)元。免疫熒光顯示MSCs及對(duì)照組細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)元NSE蛋白，誘導(dǎo)后細(xì)胞NSE、MAP-2蛋白陽性，但誘導(dǎo)前后細(xì)胞始終未表達(dá)膠質(zhì)細(xì)胞GFAP蛋白。免疫印跡顯示MSCs及對(duì)照組細(xì)胞輕度表達(dá)nestin、NSE蛋白，隨著誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)，nestin的表達(dá)漸減弱，NSE和MAP-2的表達(dá)漸增強(qiáng)，但誘導(dǎo)前后細(xì)胞始終未表達(dá)膠質(zhì)細(xì)胞GFAP蛋白。
　　2.正常培養(yǎng)的MSCs不表達(dá)初級(jí)纖毛。經(jīng)過預(yù)誘導(dǎo)或饑餓處理24h后

3、，MSCs表達(dá)初級(jí)纖毛、蛋白Ptc1、Smo和Gli1，其中Smo和Gli1位于胞漿，Ptc1位于初級(jí)纖毛。白藜蘆醇誘導(dǎo)后，Smo從細(xì)胞漿進(jìn)入初級(jí)纖毛，Gli1從細(xì)胞漿進(jìn)入細(xì)胞核，同時(shí)，Smo、Gli1蛋白的表達(dá)增加。在正常培養(yǎng)時(shí)，白藜蘆醇不能促使Smo移位以及MSCs向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化。當(dāng)MSCs表達(dá)初級(jí)纖毛時(shí)，白藜蘆醇以及Smo激動(dòng)劑SAG可使Smo從胞漿進(jìn)入初級(jí)纖毛，同時(shí)伴隨MSCs向神經(jīng)元樣細(xì)胞的分化和蛋白Smo、Gli1的表達(dá)