β1腎上腺素受體基因C389G位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與特發(fā)室性早搏相關(guān)性研究.pdf

1、一、研究背景:
　　 特發(fā)室性早搏(Idiopathic premature ventricular contractions,IPVCs)是臨床上最常見心律失常之一,是指不伴有器質(zhì)性心臟病證據(jù)的室性早搏,發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。既往認(rèn)為是“良性”病變,但目前發(fā)現(xiàn)極少部分預(yù)后差,可致病理或器質(zhì)性心臟改變,嚴(yán)重者易觸發(fā)致命性室性心律失常而猝死。臨床藥物治療效果不理想,易反復(fù)發(fā)作,造成患者心理、精神上的沉重負(fù)擔(dān),降低生活質(zhì)量。近年來射

2、頻消融(Radiofrequency ablation,RFCA)技術(shù)的發(fā)展,多數(shù)頻發(fā)的IPVCs 可以根治,但其適應(yīng)癥存在爭議,僅限于頻發(fā)、癥狀明顯且藥物效果不好的患者。上述問題可歸結(jié)于對其發(fā)病機(jī)制認(rèn)識不深。隨著分子遺傳學(xué)的發(fā)展,心律失常的分子機(jī)制可深入闡明,探討群體間致病基因單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism,SNP)已成可能,且有望依據(jù)基因型指導(dǎo)臨床的防治舉措。心電活動受自主神經(jīng)系統(tǒng)緊密調(diào)

3、節(jié),β1 腎上腺素能受體(β1adrenergic receptor,β1-AR)是心臟的主要 β-AR,在介導(dǎo)心臟交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮著重要的作用。β1-AR 基因有兩個最重要的SNP:核苷酸145A→G 和1165C→G,相應(yīng)的氨基酸置換分別為 49 位 Ser→Gly,389 位 Arg→Gly。其中 Arg389Gly(C389G)SNP 位于細(xì)胞內(nèi)胞漿尾端近第七跨膜區(qū),此處被認(rèn)為是受體與 Gs 蛋白偶聯(lián)的重要區(qū)域

4、。體外突變研究表明 Arg389 受體與Gly389受體相比具有更高的基礎(chǔ)腺苷酸環(huán)化酶活性和異丙腎上腺素激動的腺苷酸環(huán)化酶活性,提示β1-AR 基因 C389G 位點(diǎn) SNP 在 IPVCs的發(fā)生與發(fā)展過程中可能具有重要的生物學(xué)意義。目前國外有研究表明 β1-AR 基因 C389G 位點(diǎn)SNP 與特發(fā)室性心律失常的發(fā)病相關(guān),且該基因分布存在種族差異,國內(nèi)尚未見相關(guān)報道。本研究采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(Polymerasec

5、hain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技術(shù)進(jìn)行病例對照研究,旨在探討國人 β1-AR 基因 C389G 位點(diǎn) SNP 與頻發(fā)的IPVCs 發(fā)生發(fā)展中的關(guān)系,期望在分子基因?qū)W水平闡明 IPVCs 發(fā)生發(fā)展的可能機(jī)制或特點(diǎn),為臨床防治提供基礎(chǔ)依據(jù)。
　　 二、研究目的:
　　 以華南地區(qū)漢族人群 144 例頻發(fā)的IPVCs患者和142例

6、健康對照者為研究對象,建立臨床資料,檢測血漿腎素活性(Plasma renin activity,PRA)及竇性心率震蕩(Heart rate turbulence,HRT)的指標(biāo)震蕩初始(turbulence onset,TO)、震蕩斜率(turbulence slope,TS)值水平,對交感神經(jīng)系統(tǒng)通路中可能涉及頻發(fā)的IPVCs 發(fā)病的β1-AR 基因 C389G 位點(diǎn)檢測,了解該位點(diǎn) SNP 與華南地區(qū)頻發(fā)的IPVCs 人群的關(guān)聯(lián)

7、情況；探討 PRA 及 HRT 各指標(biāo)與 β1-AR 基因 C389G位點(diǎn) SNP的關(guān)系；并進(jìn)一步對頻發(fā)的IPVCs患者進(jìn)行 RFCA 治療,比較治療前后 PRA 及 HRT 各指標(biāo)變化與 β1-AR 基因 C389G 位點(diǎn) SNP的關(guān)系。從而在自主神經(jīng)調(diào)節(jié)的角度探索 β1-AR 基因在華南漢族人群頻發(fā)性IPVCs發(fā)生發(fā)展中的可能作用。
　　 三、研究對象:
　　 研究對象均來自2007年9月～2009年8月南方醫(yī)院心內(nèi)

8、科因頻發(fā)IPVCs住院病人及健康體檢人員。IPVCs組入選標(biāo)準(zhǔn):①24h動態(tài)心電圖檢查總室早數(shù)目大于720/24h且能進(jìn)行HRT分析(有任-室早的前2次、后15次心律為竇性心律)者；②體檢、胸片、心臟彩超等檢查均未發(fā)現(xiàn)器質(zhì)性心臟??；③無其他重要臟器疾患、電解質(zhì)紊亂及其他可致室性早搏的因素。排除標(biāo)準(zhǔn):①非竇性心律患者,如房顫、房撲、臨時和永久起搏器植入者等；②病態(tài)竇房結(jié)綜合征、房室傳導(dǎo)阻滯者:③ 1 周內(nèi)服用抗心律失常藥物及影響自主神經(jīng)藥

9、物者。對照組入選標(biāo)準(zhǔn):健康體檢人員:①24h動態(tài)心電圖檢查早搏數(shù)小于100/24h者,并同時符合室早組的②、③及上述排除標(biāo)準(zhǔn)的患者。所有研究對象均為華南地區(qū)漢族人群(無血緣關(guān)系),且已獲知情同意。
　　 根據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn),共入選頻發(fā)特發(fā)室早患者 144 例,年齡平均(42.98±10.03)歲,其中男性56例,女性88例,24h室早數(shù)(12671±8464)次,室早負(fù)荷(24h室早數(shù)占總心率的百分比:11.63±7.82)；入選健康

10、對照組142例,年齡平均(42.01±8.96)歲,其中男性51例,女性91例,24h室早數(shù)(44±29)次,室早負(fù)荷(0.04±0.03)。
　　 四、研究方法:
　　 兩組均建立臨床資料觀察表,詳細(xì)記錄研究對象的姓名、性別、年齡、身高、體重、血壓、吸煙史、飲酒史等一般情況；測定血清生化指標(biāo):膽固醇(totalcholesterol,TC)、甘油三脂(Triglyceride,TG)、血糖、血鈉、血鉀、血漿腎素活性(P

11、RA)；均進(jìn)行24h動態(tài)心電圖檢查:記錄24h室早總數(shù)、平均心率、室早負(fù)荷(24h 室早總數(shù)占總心率的百分比),并進(jìn)行HRT初始值(TO)、震蕩斜率(TS)的分析計算。用試劑盒提取研究對象靜脈血白細(xì)胞基因組 DNA,采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)法鑒定 β1-AR 基因C389G 位點(diǎn)的多態(tài)性(SNP)。對室早負(fù)荷≥10.0的癥狀性頻發(fā)室早患者進(jìn)行射頻消融治療,術(shù)后1月檢測血 PRA 并作24h動態(tài)心電圖檢

12、查進(jìn)行HRT分析。
　　 比較兩組之間不同基因型、等位基因頻率的分布及臨床資料、各血生化指標(biāo)、PRA 等的差異。比較不同基因型心率震蕩 TO、TS 值及 HRT 異常率的差異。比較不同基因型頻發(fā)室早患者射頻消融前后的PRA、TO、TS 值的變化,分析β1-AR 基因 C389G 位點(diǎn) SNP 與 RFCA 療效的關(guān)系。HRT 異常定義:TO 值≥0％和(或)TS≤2.5ms/RR。
　　 五、統(tǒng)計分析:
　　 用

13、SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析。計量資料符合正態(tài)分布的以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,計數(shù)資料以頻數(shù)表示。遺傳平衡檢驗采用 Hardy-Weinberg 平衡定律。計數(shù)資料組間比較采用x2檢驗。正態(tài)分布計量資料的組間比較經(jīng)方差齊性檢驗,多樣本均數(shù)比較方差齊性者采用one-way ANOVA,同一樣本均數(shù)前后比較采用協(xié)方差分析,組間多重比較采用LSD法；兩樣本間均數(shù)比較方差齊者采用獨(dú)立樣本的t檢驗,方差不齊者采用t’檢驗。用單變量logistic 回歸

14、分析探討基因多態(tài)性與室早發(fā)生的關(guān)系,計算優(yōu)勢比(odds ratio,OR)及95％可信區(qū)間(95％confidenceinterval,95％ CI)。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。
　　 六、結(jié)論:
　　 1.β1-AR 基因 C389G 位點(diǎn) SNP 存在于華南地區(qū)漢族人群中,其分布頻率在特發(fā)室早及健康人群之間不同。
　　 2.β1-AR 基因 C389G 位點(diǎn) SNP 與華南地區(qū)漢族人群特發(fā)室早的發(fā)生有相關(guān)性,C

15、 等位基因是室早的易患基因,G 等位基因是室早發(fā)生的保護(hù)基因。
　　 3.β1-AR 基因 C389G 位點(diǎn) SNP 與 HRT的異常有相關(guān)性,其與 HRT 異常率的關(guān)系為:GG　　 4.β1-AR 基因 C389G 位點(diǎn) SNP 影響特發(fā)室早發(fā)生的可能機(jī)制:C 等位基因?qū)е赂呓桓猩窠?jīng)興奮性及自主神經(jīng)功能異常,進(jìn)而增加特發(fā)室早的發(fā)病風(fēng)險。
　　 5.射頻消融治療對各基因型頻發(fā)室早自主神經(jīng)改善的效果