EGFR基因單核苷酸多態(tài)性與結直腸癌的相關性.pdf

1、背景與目的
　　 結直腸癌是全世界常見的惡性腫瘤之一。從全世界范圍來看,中國是結直腸癌的低發(fā)區(qū),但目前,結直腸癌在中國已是發(fā)病率居于第五位的常見惡性腫瘤且其發(fā)病率呈上升趨勢。普遍認為結直腸癌是多因素參與且相互作用的復雜疾病,涉及到一系列的病理生理反應。流行病學研究發(fā)現(xiàn)結直腸癌發(fā)病的高危因素主要有個人的遺傳因素、生活方式、環(huán)境因素、藥物使用情況等。
　　 結直腸癌發(fā)生、發(fā)展的確切機制到目前仍未被完全闡明。對結直腸癌的研究涉

2、及很多方面,其中在DNA水平上,對于基因組的單核苷酸多態(tài)性與結直腸癌的相關性研究相對較少。
　　 單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,簡稱SNPs)是第三代遺傳標記。目前,基因單核苷酸多態(tài)性與疾病的遺傳易感性、患者對臨床治療的敏感性、患者的預后等領域得到重視和深入研究,某些基因的單核苷酸多態(tài)性與腫瘤的關系已得到證實。
　　 表皮生長因子受體(epidermal growth f

3、actor receptor,簡稱EGFR)屬于ErbB受體型酪氨酸激酶家族成員,它具有酪氨酸蛋白激酶活性,能促進上皮細胞增生,與細胞的惡變密切相關,其基因定位于第7號染色體短臂1區(qū)1帶至1區(qū)3帶(7p11-p13),由28個外顯子構成。多項研究表明:EGFR與結直腸癌的發(fā)生、發(fā)展有相關性,EGFR基因突變與腫瘤患者的臨床病理特征、藥物療效具有相關性。
　　 目前,關于EGFR基因第15外顯子T53C位點單核苷酸多態(tài)性與疾病關系

4、的研究在國內(nèi)、外還未見報道,第13外顯子G64A位點單核苷酸多態(tài)性與疾病關系的研究在國內(nèi)報道較少。本研究采用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,簡稱PCR-RFLP)方法結合DNA測序法對93例中國河南省漢族結直腸癌患者外周血DNA中的EGFR基因第15外顯子T53C單核苷酸多態(tài)性位點與第13外顯子G6

5、4A單核苷酸多態(tài)性位點的基因型進行檢測,旨在探討此二位點在中國河南省漢族結直腸癌患者中的基因型頻率和等位基因頻率及其與結直腸癌的相關性。
　　 材料與方法
　　 1.外周靜脈血標本采集于無血緣關系的93例中國河南省漢族結直腸癌患者,采集時間為2009年2月至2009年9月。93例結直腸癌患者均在鄭州大學第一附屬醫(yī)院行外科手術治療,于患者術前采血1ml～1.5ml。
　　 2.采用離心柱法對93例中國河南省漢族結直

6、腸癌患者的外周靜脈血基因組DNA進行抽提。
　　 3.采用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)法對93例中國河南省漢族結直腸癌患者的EGFR基因外顯子15 T53C單核苷酸多態(tài)性位點與外顯子13 G64A單核苷酸多態(tài)性位點進行基因分型。
　　 4.采用DNA測序法對PCR-RFLP法的基因分型結果進行驗證。
　　 5.統(tǒng)計學處理:采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件,對無序分類資料采用x2檢驗,以優(yōu)勢

7、比(odds ratio,OR)及其95％可信區(qū)間(95％confidence interval,95％CI)表示相對風險度,運用Logistic回歸模型計算OR及其95％CI;對有序分類資料采用秩和檢驗,通過比較平均秩次判斷風險度大小。統(tǒng)計檢驗中涉及單雙側(cè)概率時,采用雙側(cè)概率檢驗,取檢驗水準α=0.05,對于多分類樣本中每兩類組間的比較采用Bonferroni法。
　　 結果：
　　 1.EGFR基因外顯子15 T53

8、C位點基因型T/C18例(19.35％),基因型T/T75例(80.6596)。等位基因T頻率為90.32％,等位基因C頻率為9.68％。
　　 2.EGFR基因外顯子15 T53C位點基因型分布頻率與中國河南省漢族結直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤生長部位、腫瘤直徑、大體形態(tài)、組織學類型、腸壁浸潤深度、分化程度、淋巴結轉(zhuǎn)移、TNM分期、血道轉(zhuǎn)移無相關性(P>0.05)。等位基因T、C分布頻率與中國河南省漢族結直腸癌患者的性別、年齡

9、、腫瘤生長部位、腫瘤直徑、大體形態(tài)、組織學類型、腸壁浸潤深度、分化程度、淋巴結轉(zhuǎn)移、TNM分期、血道轉(zhuǎn)移無相關性(P>0.05)。
　　 3.EGFR基因外顯子13 G64A位點基因型G/G26例(27.96％),基因型G/A45例(48.39％),基因型A/A22例(23.65％)。等位基因G頻率為52.15％,等位基因A頻率為47.85％。
　　 4.EGFR基因外顯子13 G64A位點基因型分布頻率與中國河南省漢族

10、結直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤生長部位、腫瘤直徑、大體形態(tài)、組織學類型、腸壁浸潤深度、分化程度、血道轉(zhuǎn)移無相關性(P>0.05),與淋巴結轉(zhuǎn)移和TNM分期有相關性(P<0.05)。等位基因G、A分布頻率與中國河南省漢族結直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤生長部位、腫瘤直徑、大體形態(tài)、組織學類型、腸壁浸潤深度、分化程度、血道轉(zhuǎn)移無相關性(P>0.05),與淋巴結轉(zhuǎn)移和TNM分期有相關性(P<0.05)。
　　 5.EGFR基因外顯子13

11、 G64A位點,攜帶基因型G/G的中國河南省漢族結直腸癌患者的結直腸癌淋巴結轉(zhuǎn)移風險增加(基因型G/G、G/A與A/A比較的OR分別為5.429、1.369)。通過Bonferroni法對每兩種基因型進行比較,取校正檢驗水準α'=0.017,結果為:基因型A/A與G/A問比較,P=0.937；基因型A/A與G/G間比較,P=0.015；基因型G/A與G/G間比較,P=0.010。攜帶基因型G/G的結直腸癌患者的結直腸癌TNM分期較高(基

12、因型A/A、G/A、G/G的平均秩次分別為40.80、43.03、59.12),通過Bonferroni法對每兩種基因型進行比較,取校正檢驗水準α'=0.017,基因型A/A與G/A間比較,P=0.734；基因型A/A與G/G間比較,P=0.016；基因型G/A與G/G間比較,P=0.012。
　　 6.EGFR基因外顯子13 G64A位點,攜帶等位基因G的中國河南省漢族結直腸癌患者的結直腸癌淋巴結轉(zhuǎn)移風險增加(等位基因G與A比

13、較的OR為2.637),進行x2檢驗,x2值為7.427,P值為0.006。攜帶等位基因G的中國河南省漢族結直腸癌患者的結直腸癌TNM分期較高(等位基因A與G的平均秩次分別為83.35、102.81)。對等位基因A與G進行Wilcoxon Test,Zc值為-2.567,P值為0.010。
　　 結論：
　　 1.EGFR基因外顯子15 T53C位點單核苷酸多態(tài)性與中國河南省漢族結直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤生長部位、腫

14、瘤直徑、大體形態(tài)、組織學類型、腸壁浸潤深度、分化程度、淋巴結轉(zhuǎn)移、TNM分期、血道轉(zhuǎn)移無相關性。
　　 2.EGFR基因外顯子13 G64A位點單核苷酸多態(tài)性與中國河南省漢族結直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤生長部位、腫瘤直徑、大體形態(tài)、組織學類型、腸壁浸潤深度、分化程度、血道轉(zhuǎn)移無相關性。
　　 3.EGFR基因外顯子13 G64A位點單核苷酸多態(tài)性與中國河南省漢族結直腸癌患者的結直腸癌淋巴結轉(zhuǎn)移、TNM分期有相關性,此單