復(fù)方柴歸方超臨界CO2萃取組分的化學(xué)、質(zhì)量及制劑研究.pdf

1、選題依據(jù):本課題是針對(duì)重大疾病之一的精神性疾病(抑郁癥)所進(jìn)行的研究。逍遙散出自宋代《太平惠民和劑局方》,由柴胡、當(dāng)歸、白芍、白術(shù)、茯苓、生姜、薄荷和甘草共八味藥組成,臨床及實(shí)驗(yàn)研究均顯示該方有確切的抗抑郁作用。前期研究中,從逍遙散類(lèi)方中篩選出逍遙散為最佳抗抑郁復(fù)方,又將逍遙散復(fù)方按極性大小分為幾個(gè)不同部位,通過(guò)一系列經(jīng)典抗抑郁模型的篩選,明確了逍遙散石油醚提取部位為抗抑郁有效部位,且藥效作用最佳。又依逍遙散石油醚提取部位的藥效學(xué)篩選及

2、化學(xué)成分分析,得出復(fù)方柴歸方(柴胡、當(dāng)歸、白術(shù)、甘草、生姜、薄荷)。考慮到石油醚在工業(yè)化生產(chǎn)中存在易燃易爆的安全隱患,又依據(jù)石油醚提取部位屬低極性成分,擬定了無(wú)毒、無(wú)污染、高效率的超臨界CO2萃取技術(shù),并運(yùn)用正交設(shè)計(jì)法,確定了超臨界CO2萃取的最佳工藝參數(shù),得到復(fù)方柴歸方超臨界CO2萃取組分。依據(jù)候選新藥與臨床前新藥研究的有關(guān)技術(shù)要求,對(duì)其化學(xué)成分,質(zhì)量控制及制劑工藝進(jìn)行研究。
　　目的:對(duì)復(fù)方柴歸方超臨界 CO2萃取組分進(jìn)行化學(xué)

3、成分分析,質(zhì)量控制研究,基本明確組分中的化學(xué)組成,建立質(zhì)控方法,依據(jù)其理化性質(zhì)對(duì)制劑工藝進(jìn)行初步探討,為組分新藥的研發(fā)提供藥學(xué)部分研究資料。
　　方法:首先,采用GC-MS、UPLC對(duì)復(fù)方柴歸方超臨界CO2萃取組分建立指紋圖譜,并進(jìn)行主要單味藥材的歸屬分析,同時(shí),結(jié)合對(duì)照品對(duì)其中的主要化學(xué)成分進(jìn)行定性識(shí)別;其次,在基本明確化學(xué)成分的基礎(chǔ)上,根據(jù)《中國(guó)藥典》2010版,進(jìn)行質(zhì)量控制的研究,主要包括性狀、鑒別、檢查、含量測(cè)定等。第三,

4、采用影響因素試驗(yàn)(高溫試驗(yàn)、高濕試驗(yàn))對(duì)萃取組分進(jìn)行穩(wěn)定性考察,在此基礎(chǔ)上,從基質(zhì)種類(lèi)、藥物與基質(zhì)比、冷凝劑種類(lèi)、助溶劑種類(lèi)等因素對(duì)滴丸制備工藝進(jìn)行考察,得到最佳工藝參數(shù)。
　　結(jié)果:1.建立了復(fù)方柴歸方超臨界 CO2萃取組分的 GC-MS、UPLC指紋圖譜。建立的GC-MS指紋圖譜共有模式中檢出共有色譜峰27個(gè),采用峰面積歸一化法計(jì)算它們的相對(duì)含量,占總峰面積的81.89％。計(jì)算萃取組分與對(duì)照?qǐng)D譜之間的相似度,均達(dá)到0.9以上。

5、UPLC指紋圖譜共有模式中確定了15個(gè)共有色譜峰,其中,2號(hào)峰為阿魏酸松柏酯(Rt:2.75min),3號(hào)峰為藁本內(nèi)酯(Rt:4.79min),7號(hào)峰、9號(hào)峰分別為2,8,10-十五烷三烯-4,6-二炔-1-醇和柴胡炔醇(Rt分別為10.43min、14.48min)。以3號(hào)峰(藁本內(nèi)酯)為參照峰,對(duì)各樣品色譜圖的原始數(shù)據(jù)文件進(jìn)行分析,計(jì)算相似度,均達(dá)0.9以上。
　　2.在化學(xué)成分分析方面,采用GC-MS、UPLC結(jié)合對(duì)照品及各

6、單味藥材的化學(xué)成分研究基礎(chǔ)進(jìn)行分析,GC-MS主要針對(duì)低極性成分,鑒定出21個(gè)化合物,分別為對(duì)傘花烴、薄荷腦、莰烯、水芹烯、α-石竹烯、花側(cè)柏烯、香橙烯、β-石竹烯、長(zhǎng)葉蒎烯、愈創(chuàng)木烯、β-柏木烯、蒼術(shù)酮、藁本內(nèi)酯、亞油酸乙酯、鄰苯二甲酸丁酯、棕櫚酸、鄰苯二甲酸二丁酯、十六酸乙酯、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、亞油酸甲酯,屬單貼、倍半萜、苯酞、黃酮、聚烯炔、脂肪酸類(lèi)等。UPLC結(jié)合對(duì)照品則是對(duì)GC-MS的補(bǔ)充,針對(duì)極性較大的成分,鑒定出阿魏酸

7、松柏酯、藁本內(nèi)酯、2,8,10-十五烷三烯-4,6-二炔-1-醇、柴胡炔醇。
　　3.在質(zhì)量控制方面,根據(jù)《中國(guó)藥典》2010版,對(duì)復(fù)方柴歸方超臨界CO2萃取組分進(jìn)行質(zhì)量控制研究,主要包括性狀、鑒別、檢查、含量測(cè)定。建立了柴胡、當(dāng)歸、白術(shù)的 TLC鑒別項(xiàng),進(jìn)行了酸值、過(guò)氧化值、皂化值的檢查,并對(duì)其中的藁本內(nèi)酯、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ進(jìn)行了含量測(cè)定,為制劑研究奠定了基礎(chǔ)。
　　4.復(fù)方柴歸方超臨界CO2萃取組分屬低極性成分,且

8、為油狀物,擬定了滴丸劑型,并對(duì)其制備工藝初步研究。首先對(duì)萃取組分的穩(wěn)定性進(jìn)行了考察,結(jié)果顯示,復(fù)方柴歸方超臨界CO2萃取組分在高溫度(40℃),在高濕度(25℃,RH90%)條件下比較穩(wěn)定。在此基礎(chǔ)上對(duì)制劑工藝參數(shù)進(jìn)行了研究,經(jīng)過(guò)一系列的篩選,基質(zhì)為PEG4000: PEG6000為2:1,藥物與基質(zhì)比為3:1,冷凝劑為液體石蠟,助溶劑為吐溫-80,滴丸成形性最佳。
　　結(jié)論:1.建立的復(fù)方柴歸方超臨界CO2萃取組分的GC-MS、

9、UPLC指紋圖譜穩(wěn)定性,精密度,重現(xiàn)性均較好。同時(shí),進(jìn)行了主要單味藥材的歸屬分析,結(jié)合對(duì)照品對(duì)其中的主要化學(xué)成分進(jìn)行定性識(shí)別,為逍遙散低極性組分新藥的研發(fā)提供了科學(xué)合理的依據(jù)。
　　2.根據(jù)《中國(guó)藥典》2010版,對(duì)萃取組分進(jìn)行質(zhì)量控制研究,主要包括性狀、鑒別、檢查、含量測(cè)定等。為進(jìn)一步建立萃取組分的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定了基礎(chǔ)。
　　3.采用影響因素試驗(yàn)(高溫試驗(yàn)、高濕試驗(yàn))對(duì)萃取組分進(jìn)行穩(wěn)定性考察,并從基質(zhì)種類(lèi)、藥物與基質(zhì)比、冷凝