鐵皮石斛葉超臨界CO2萃取、成分分析及免疫功能初步研究.pdf

1、鐵皮石斛(Dendrobium Candida)為蘭科石斛屬多年生草本植物。作為傳統(tǒng)中藥，鐵皮石斛經多年證實有顯著的功效。經證明，鐵皮石斛可以抵抗免疫力低下、減緩衰老、減輕自由基的氧化作用，可以一定程度上治療勞累病、腎病、糖尿病。此外，鐵皮石斛具有浸潤肺部、口腔生津、滋養(yǎng)脾胃的作用。
　　石斛多糖是鐵皮石斛中促進免疫和抗腫瘤作的主要成分。近年來，關于鐵皮石斛多糖的提取方法有很多。利用單因素試驗設計和正交試驗設計方法，研究溫度、粉碎

2、樣大小、時間、CO2流量等對于最終結果萃取率的影響，并且優(yōu)化出最適工藝參數(shù)。同時對鐵皮石斛提取物進行成分分析，并且最終應用到小鼠體內，以小鼠的體重變化、免疫器官指數(shù)、外周血白血細胞數(shù)為指標，對鐵皮石斛資源的綜合利用提供了理論依據，對鐵皮石斛多糖的免疫調節(jié)功能分析。
　　1.超臨界CO2萃取鐵皮石斛葉工藝的研究和提取物成分分析
　　超臨界CO2的關鍵工藝參數(shù)，如壓力、時間、溫度、C02流量、粉碎粒度決定鐵皮石斛葉多糖最終得率結

3、果。在查詢相關資料和文獻指導的背景下，本試驗的重要環(huán)節(jié)設備分離器的壓力和溫度為:分離器Ⅰ和分離器Ⅱ的壓力為100～103bar、43～46bar;溫度為40℃、35℃。經過單因素試驗和正交試驗，我們最終得到的最優(yōu)工藝參數(shù)是:粒徑控制在40～60目，在250bar壓力，45℃的溫度下，萃取90min，控制CO2流量20L/h，得到鐵皮石斛葉提取液的最大萃取得率可以達到5.2％。
　　經過萃取技術得到的是鐵皮石斛葉的提取物。為了證明該

4、提取物的主要有效成分，我們采用苯酚-硫酸法對其中的石斛多糖成分進行測定，證明了石斛多糖其是主要成分，并進行了精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性試驗。采用比色法法測定多糖含量，穩(wěn)定性、精密度、重現(xiàn)性試驗結果的相對標準偏差均小于5％。利用氣質聯(lián)用技術，測定鐵皮石斛提取物中含有一定量的脂肪酸:十八烷酸、棕櫚酸、亞油酸和其他物質。最終得到去除蛋白和色素等雜質的鐵皮石斛粗多糖(DCP)的質量分數(shù)為41.77％。
　　2.鐵皮石斛葉對小鼠免疫功能的影響<

5、br>　　鐵皮石斛提取物從特異性、非特異性免疫方面對小鼠增加免疫力有顯著地促進作用。本試驗給昆明SPF級小鼠注射環(huán)磷酰胺，造成小鼠免疫力低下模型。與對照比較，添加鐵皮石斛粗多糖(DCP)的用藥組能夠顯著改變因致免疫低下造成的小鼠的生長緩慢，脾臟指數(shù)顯著性差異，但是胸腺指數(shù)差異不顯著。在小鼠的血液理化指標方面，用藥組可以減緩免疫力低下小鼠的外周白細胞數(shù)的下降和促進正常小鼠外周白細胞數(shù)的增加。此外，鐵皮石斛粗多糖(DCP)能增加免疫力小鼠低