脂肪干細(xì)胞治療促進(jìn)組織血管化的旁分泌機(jī)制中細(xì)胞因子來源的探討.pdf

1、目的：探索脂肪干細(xì)胞(adipose-derived cells，ADSCs)治療促進(jìn)組織血管化的治療機(jī)理，為細(xì)胞治療的臨床轉(zhuǎn)化研究提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：1、ADSCs的分離培養(yǎng)與鑒定
　　 在無菌條件下，取出wistar大鼠腹股溝脂肪墊，用氯霉素沖洗，于膠原酶中振蕩消化，低速離心，細(xì)胞篩網(wǎng)過濾后接種于培養(yǎng)皿，獲得原代ADSCs。
　　 取第三代ADSCs用成軟骨、成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)液誘導(dǎo)培養(yǎng)，分別行Ⅱ型膠原染色

2、及油紅O染色鑒定。
　　 2、建立裸鼠隨意皮瓣模型
　　 在裸鼠背部掀起1cm×2.5cm大小隨意皮瓣，于皮瓣肉膜面分別注射約1×107個已標(biāo)記CM-Di1的ADSCs0.2ml混懸液(實(shí)驗(yàn)組)及等體積的PBS(對照組)。
　　 3、血管化細(xì)胞因子水平分析
　　 3、1將植入的ADSCs與裸鼠自身的細(xì)胞分選出
　　 上述動物模型一部分分別在術(shù)后第1、3、7天取材，將皮瓣組織于無菌條件下取出并剪碎，

3、用0.2％的膠原酶于37℃振蕩消化1h后，用等體積含10％胎牛血清DMEM液中止消化，離心后用2％FBS重懸，用流式細(xì)胞儀將DiL標(biāo)記的陽性細(xì)胞與裸鼠自身的陰性細(xì)胞分選出。
　　 3、2分選后的細(xì)胞提RNA行VEGF、bFGF及HIF-1α的定量PCR分析。
　　 結(jié)果：1、大鼠ADSCs貼壁后呈成纖維細(xì)胞樣形態(tài)。第三代ADSCs經(jīng)成脂、成軟骨誘導(dǎo)分化后，染色結(jié)果均為陽性。
　　 2、ADSCs治療組皮瓣成活率顯

4、著高于對照組，p<0.001，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 3、流式細(xì)胞分選結(jié)果提示，在細(xì)胞治療后第1、3、7天，植入的細(xì)胞數(shù)量(帶熒光標(biāo)記的陽性細(xì)胞)呈明顯下降趨勢。
　　 4、定量PCR結(jié)果提示：經(jīng)細(xì)胞治療干預(yù)的皮瓣組織，其HIF-1α及其下游分子的表達(dá)水平較對照組高，且隨時(shí)間推移有增加趨勢。
　　 結(jié)論：促進(jìn)損傷組織血管化的細(xì)胞因子來源于裸鼠自身，而并非植入的ADSCs所分泌。證實(shí)了細(xì)胞的植入其實(shí)是通過上調(diào)組織自身