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文檔簡介
1、第一部分胚胎干細(xì)胞分泌因子對肝纖維化相關(guān)細(xì)胞的作用目的:
肝纖維化過程中,肝星狀細(xì)胞(Hepatic stellate cell,HSC)和肝實質(zhì)細(xì)胞在其中起著重要的作用,尤其是肝星狀細(xì)胞,在肝臟損傷早期被激活,轉(zhuǎn)變?yōu)槌杉±w維樣細(xì)胞,分泌細(xì)胞外基質(zhì)蛋白,增加細(xì)胞外基質(zhì)的沉積,抑制其降解。我們研究胚胎干細(xì)胞分泌因子對肝星狀細(xì)胞的作用,有助于了解其對肝纖維化的影響。
方法:
由于直接移植胚胎干細(xì)胞有形成畸胎瘤等
2、危險,我們采用含胚胎干細(xì)胞分泌因子的上清培養(yǎng)液,即胚胎干細(xì)胞條件培養(yǎng)基(ESC-S),研究其對對肝星狀細(xì)胞和肝實質(zhì)細(xì)胞的作用。用ESC-S處理細(xì)胞后,觀察細(xì)胞的生長和形態(tài)的變化,檢測其中基因的改變和蛋白表達的變化情況。
結(jié)果:
胚胎干細(xì)胞條件培養(yǎng)液可活化肝星狀細(xì)胞,促進其顯著增殖,細(xì)胞中的活化標(biāo)志物蛋白顯α-SMA和desmin著升高。ESC-S還可能通過上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)來促進肝星狀細(xì)胞的激活。M1型巨噬細(xì)胞
3、的分泌培養(yǎng)液對肝星狀細(xì)胞有促進作用,而M2c型巨噬細(xì)胞的分泌培養(yǎng)液有抑制肝星狀細(xì)胞活化的作用。ESC-S對肝實質(zhì)細(xì)胞有抑制其生長,誘導(dǎo)其凋亡的作用。
結(jié)論:
胚胎干細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子對肝細(xì)胞有正向調(diào)節(jié)作用,而對肝細(xì)胞有損傷作用。
第二部分胚胎干細(xì)胞分泌因子對小鼠肝纖維化的影響
目的:
在前面的實驗中我們可知ESC-S對肝星狀細(xì)胞有促進和活化的作用,為進一步明確ESC-S對肝臟纖維化的作用
4、,在小鼠體內(nèi)研究其對肝臟功能的影響。
方法:
我們構(gòu)建了四氯化碳肝纖維化模型,在注射四氯化碳的同時給予小鼠Con-M或ESC-S注射,共持續(xù)6周時間。6周后,對肝臟組織進行冰凍切片,同時對這些肝組織切片進行Sirius Red染色,觀察兩組肝組織中纖維化的程度。為進一步探討ESC-S對小鼠肝臟的影響,我們將ESC-S通過腹腔注入小鼠體內(nèi),每周注射3次,每次注射1ml,持續(xù)6周時間。6周后,將小鼠予以安樂死,從下腔靜脈
5、取血,并獲取肝臟標(biāo)本。
結(jié)果:
在ESC-S與四氯化碳共同注射的小鼠肝臟中,HSC的活化標(biāo)志物明顯增多,膠原蛋白在細(xì)胞外基質(zhì)中的沉積亦增加。在ESC-S獨立處理組小鼠中,血清肝酶升高明顯,細(xì)胞外基質(zhì)的沉積也較對照組多。ESC-S處理的小鼠肝臟中有較多的巨噬細(xì)胞富集。
結(jié)論:
ESC-S能夠啟動并導(dǎo)致肝纖維化,富集M1型巨噬細(xì)胞到肝內(nèi),加速肝臟損傷,而且在原有肝臟損傷的基礎(chǔ)上,輔助和加速了肝臟的纖維
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