灰樹花化學成分及抗腫瘤細胞增殖作用研究.pdf

1、灰樹花（Grifola frondosa）是一種珍貴的食藥兩用菌，屬擔子菌亞門，層菌綱，非褶菌目，多孔菌科，樹花菌屬真菌。有抗腫瘤、提高免疫力、降血糖、抗病毒、抗輻射、清除自由基等功效?；覙浠ń硪阎幕瘜W成分主要包括多糖、核酸、多酚、氨基酸、微量元素等，對灰樹花中的小分子化合物儀報道過粗多酚，由于未進行充分的純化，無法全面了解化合物的類型、含量及它們與灰樹花藥理作用的關系。
　　 本文對灰樹花小分子化合物進行了深入的分離、純化并

2、對獲得的化合物進行化學結構研究和抑制腫瘤細胞增殖作用的測定。值得指出的是，我們發(fā)現(xiàn)5，8-位存在過氧鍵對抑制腫瘤細胞增殖作用很重要，該結果為抗癌先導化合物的修飾積累了經驗，以加快抗癌新藥研發(fā)的速度。
　　 本論文運用一種新型高效的天然產物檢識方法對灰樹花依次對水相、乙醇相、石油醚相進行了系統(tǒng)檢識，結果表明，水相中含有三萜皂苷；乙醇相含有生物堿、萜類內酯、香豆素、有機酸、黃酮、甾體、三萜類物質；石油醚相含有甾體和三萜類物質。

3、>　　 灰樹花分別用95％乙醇提取、乙酸乙酯萃取、硅膠柱層析，得到13個組分。運用MTT比色法，以人乳腺癌細胞MCF-7模型進行篩選，逐級活性追蹤，最終追蹤到隱藏在上千種化合物中的活性日標物。使用新型微量重結晶法純化，得到了三個化合物。用lHNMR、13CNMR核磁共振等波譜學方法鑒定了3個甾醇類化合物的結構，分別為：5a，8β-過氧麥角甾-6，22-一烯-3β-醇、麥角甾醇3β，5a，6β-三羥基麥角甾醇。
　　 運用MTT

4、比色法、流式細胞術研究它們對MCF-7細胞增殖的影響，發(fā)現(xiàn)三種化合物具有不同程度的抑制作用。5a，8β-過氧麥角甾-6，22E-二烯-3β-醇能明顯MCF-7增殖，且有明顯的促凋亡作用；麥角甾醇和3β，5a，6β-三羥基麥角甾醇輕微抑制MCF-7增殖。
　　 化合物I、II、Ⅲ的結構極相似，因此進行構效分析，尋找起抗癌作用的關鍵基團，結果表明，5，8-位含有過氧鍵對麥角甾醇類物質具有抑制MCF-7增殖作用是極其重要的。
　

5、　 綜上所述，本文的主要結果如下
　　 l、首次提出灰樹花中含有香豆素、萜類內酯、黃酮、有機酸、生物堿、甾體、三萜等多種天然物質，對灰樹花中含有的小分子物質有了全面系統(tǒng)的認識，為深度開發(fā)利用灰樹花打下了基礎。
　　 2、首次從灰樹花中純化得到以下三種化合物：5a，8β-過氧麥角甾-6，22E-二烯-3β-醇，麥角甾醇和3β，5α，6β-三羥基麥角甾醇，對灰樹花的化學成分有了更深入的了解。
　　 3、5β8β-過

6、氧麥角甾-6，22-二烯-3β-醇有明顯抑制MCF-7增殖的作用，并有明顯的促凋亡作用，麥角甾醇和3β，5a，6β-三羥基麥角甾醇有輕微抑制其增殖的作用。
　　 4、通過效分析，5，8-位存在過氧鍵對麥角甾醇類物質具有抑制MCF-7增殖作用重要，為抗痛藥研發(fā)過程中的關鍵步驟即抗痛先導化合物的化學修飾積累經驗。
　　 5、改進了天然產物的檢識方法，大幅降低了檢識過程巾的假陽性和假陰性率；改進了傳統(tǒng)重結晶法，可實現(xiàn)毫克級樣品