mTOR在缺氧預(yù)處理早期減輕心臟缺血再灌注損傷中的作用.pdf

1、目的：探討哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白在缺氧預(yù)處理早期心肌保護(hù)中的作用及其對(duì)HIF1α的影響。
　　方法：選擇出生1~3天的SD大鼠乳鼠，分離培養(yǎng)原代心肌細(xì)胞，隨機(jī)分為六組：對(duì)照組（C組）、雷帕霉素組（Rapa組）、氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖組（OGD/R組）、雷帕霉素+氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖組（Rapa+ OGD/R組）缺氧預(yù)處理+氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖組（HPC+OGD/R組）、雷帕霉素+缺氧預(yù)處理+氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖組（Rapa+HPC+OGD/

2、R組）。根據(jù)分組建立OGD/R與HPC模型，Rapa干預(yù)時(shí)長為60min，終濃度20nm/L。觀察各組心肌細(xì)胞的搏動(dòng)頻率，測(cè)定細(xì)胞活力（MTT, OD，490nm）與細(xì)胞損傷程度（LDH），qRT-PCR法測(cè)定mTOR與HIF1αmRNA表達(dá)水平。并應(yīng)用Langendorff模型在離體心臟水平驗(yàn)證。
　　結(jié)果：與C組比較，OGD/R組、HPC+ OGD/R組、Rapa+ HPC+ OGD/R組心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率與MTT值下降（P<0

3、.05），LDH升高（P<0.05）；與OGD/R組比較, HPC+ OGD/R組心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率與MTT值升高（P<0.05），LDH下降（P<0.05）；與HPC+ OGD/R組比，Rapa+ HPC+ OGD/R組心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率與MTT值下降（P<0.05），LDH升高（P<0.05）。HIF1α與mTOR mRNA水平在HPC后兩小時(shí)內(nèi)上升，雷帕霉素會(huì)降低二者表達(dá)水平。Langendorff模型中，雷帕霉素也減輕了HPC的心肌