甲基化酶抑制劑5-氮雜胞苷對HL60細胞作用及相關(guān)機制研究.pdf

1、重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文甲基化酶抑制劑5-氮雜胞苷對HL60細胞作用及相關(guān)機制研究姓名：蘇庸春申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：徐酉華20100501重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文P 1 6 基因、D A P K 基因及M G M T 基因的甲基化狀態(tài)，探討H L 6 0 細胞系基因甲基化狀態(tài)及5 ．氮雜胞苷對甲基化基因的逆轉(zhuǎn)作用，采用R T - P C R 技術(shù)檢測5 ．氮雜胞苷作用前后H L 6 0 細胞P 1 6 基因、D

2、A P K 基因及M G M T 基因的表達情況；從而進一步探討5 ．氮雜胞苷的作用機理及證明基因甲基化在白血病發(fā)生、發(fā)展中的作用。3 ．比較蛋白質(zhì)組學(xué)方法分析5 ．氮雜胞苷對H L 6 0 的可能作用機制：通過雙向電泳技術(shù)對5 ．氮雜胞苷處理前后H L 6 0 細胞總蛋白進行分離，用P D q u e s t ( 8 ．O ) 軟件對掃描的二維凝膠電泳圖像進行分析，篩選出5 ·氮雜胞苷處理H L 6 0 細胞前后差異表達的蛋

3、白質(zhì)斑點。對候選差異表達蛋白質(zhì)斑點經(jīng)膠內(nèi)胰酶酶解，經(jīng)基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜( M A L D I - T O F - M S ) 分析，得到肽指紋圖譜( p e p t i d e m o s s f i n g e r p r i n t i n g ，P M F ) ，使用M a s c o t 軟件在S w i s s p r o t 數(shù)據(jù)庫中檢索鑒定差異表達蛋白質(zhì)，并對差異蛋白質(zhì)進行生物信息學(xué)分析。結(jié)果1 ．在H L

4、6 0 細胞中加入不同濃度的5 ．氮雜胞苷，培養(yǎng)2 4 、4 8 、7 2小時后發(fā)現(xiàn)：各濃度5 ．氮雜胞苷均可以不同程度的抑制細胞生長，且表現(xiàn)為時間、濃度依賴性。同一濃度的5 ．氮雜胞苷作用于H L 6 0 細胞，隨著時間的延長，其抑制效應(yīng)增加；在同一時間點，隨著濃度的增加，5 ．氮雜胞苷的增殖抑制效應(yīng)逐漸增強。根據(jù)抑制率結(jié)果計算出作用2 4 、4 8 、7 2 小時的I C 5 0 為5 6 ．7 6 1 x m o l ／L 、5