組蛋白甲基化抑制劑DZNep對移植免疫中CD8+T細(xì)胞調(diào)控作用的研究.pdf

1、目的:在通過同種異基因造血干細(xì)胞移植(Allogeneic-hematopoietic stem cell transplantation,Allo-HSCT)來誘導(dǎo)造血細(xì)胞嵌合體形成進(jìn)而誘導(dǎo)免疫耐受的過程中,研究組蛋白甲基化抑制劑DZNep是否可以預(yù)防供體源性CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的移植物抗宿主病(Graft-versus-host disease,GVHD)的發(fā)生,并進(jìn)一步探討DZNep對Allo-HSCT中供體源性CD8+T細(xì)胞的調(diào)控

2、作用及其機(jī)制。
　　方法:建立供/受體間基因型為MHC相同而miHA不同的小鼠Allo-HSCT模型,研究DZNep處理對此模型中由供體源性CD8+T細(xì)胞所介導(dǎo)的GVHD的影響。通過比較DZNep處理/未處理受體小鼠Allo-HSCT后體重變化、長期生存率、GVHD臨床評分及GVHD靶器官/組織病理學(xué)改變上的差異,評價(jià)DZNep在預(yù)防GVHD方面的療效;利用FACS技術(shù)對Allo-HSCT后多個(gè)時(shí)間點(diǎn)的供體源性CD8+T細(xì)胞進(jìn)行表

3、型分析,進(jìn)而研究DZNep對供體源性CD8+T細(xì)胞的調(diào)控作用及其調(diào)控機(jī)制;通過對Allo-HSCT后受體小鼠的胸腺細(xì)胞和骨髓細(xì)胞進(jìn)行FACS等相關(guān)分析,評價(jià)DZNep對術(shù)后嵌合體狀態(tài)形成的影響及DZNep的體內(nèi)毒副作用。
　　結(jié)果:DZNep可以顯著改善受體小鼠體重降低程度(p＜0.05)、長期生存率(p＜0.05)、GVHD臨床評分(p＜0.05)及靶器官/組織病理學(xué)改變,因而能夠預(yù)防供體源性CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的GVHD的發(fā)生;

4、通過機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),DZNep可以抑制供體源性CD8+T細(xì)胞的早期活化及受體抗原特異性的CD8+T細(xì)胞的增殖(p＜0.05),從而能夠減少脾臟、淋巴結(jié)中供體源性CD8+T細(xì)胞的絕對數(shù)量(p＜0.05);細(xì)胞表型分析顯示,DZNep可以抑制術(shù)后第8天(D8)供體源性CD8+T細(xì)胞上TNF-α及IL-2的表達(dá)水平(p＜0.05),卻能增加術(shù)后第14天(D14)供體源性CD8+T細(xì)胞上IL-2的表達(dá)水平(p＜0.05);雖然DZNep對脾臟中供

5、體源性CD8+T細(xì)胞上IFN-γ、FasL、Trail、GranzymeB(GzmB)的表達(dá)水平無明顯影響(p＞0.05),卻可以顯著抑制肝臟中CD8+T細(xì)胞上IFN-γ的表達(dá)(p＜0.05);由于脾臟中供體源性CD8+T細(xì)胞的絕對數(shù)量的顯著減少(p＜0.05),脾臟中供體源性IFN-γ+CD8+T細(xì)胞、FasL+CD8+T細(xì)胞、Trail+CD8+T細(xì)胞、GzmB+CD8+T細(xì)胞及TNF-α+CD8-T細(xì)胞的絕對數(shù)量在DZNep處理組

6、顯著減少(p＜0.05);DZNep還顯著抑制了導(dǎo)致GVHD發(fā)生的供體源性效應(yīng)性CD8+T細(xì)胞的生成(p＜0.05);此外DZNep在調(diào)控供體源性CD8+T細(xì)胞免疫反應(yīng)性的同時(shí)并未影響受體體內(nèi)造血細(xì)胞嵌合體的形成。
　　結(jié)論:DZNep通過調(diào)控Allo-HSCT中供體源性CD8+T細(xì)胞的免疫反應(yīng)性,在阻止供體源性CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的GVHD發(fā)生的同時(shí)實(shí)現(xiàn)了造血細(xì)胞嵌合體的形成。因此,我們發(fā)現(xiàn)了組蛋白甲基化抑制劑DZNep在預(yù)防Al