凋亡相關(guān)基因PDCD5、Survivin在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義研究.pdf

1、1目的：
　　 肺癌是危害人類健康的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率極高,且在老年人群中高發(fā)。近年來,多項(xiàng)研究表明肺癌的發(fā)生、發(fā)展不僅與原癌基因的激活、抑癌基因的失活導(dǎo)致細(xì)胞增生過度和分化異常有關(guān),還與細(xì)胞凋亡異常有關(guān)。PDCD5是人程序化死亡因子5,Survivin是生存蛋白。研究表明PDCD5是凋亡促進(jìn)基因,Survivin是凋亡抑制基因。通過凋亡相關(guān)基因PDCD5、Survivin在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中的表達(dá)情況及相

2、關(guān)性的研究,來探討PDCD5、Survivin的臨床生物學(xué)意義及NSCLC的發(fā)病機(jī)制,為NSCLC的早期診斷、治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 2對(duì)象與方法：
　　 2.1研究對(duì)象
　　 收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科2008年1月～2009年11月間胸外科手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)為NSCLC的肺癌組織標(biāo)本60例作為實(shí)驗(yàn)組,同時(shí)取20例NSCLC癌旁正常肺組織(即距腫瘤邊緣大于3cm并經(jīng)病理證實(shí)為正常的肺組織)作為對(duì)照組。所

3、有入選的肺癌病人術(shù)前均未接受任何抗腫瘤治療。
　　 2.2實(shí)驗(yàn)方法
　　 采用免疫組化S-P法檢測(cè)PDCD5、Survivin在肺腺癌、肺鱗癌及癌旁正常肺組織中的表達(dá)情況。采用TUNEL法檢測(cè)凋亡細(xì)胞,計(jì)算凋亡指數(shù)AI。
　　 2.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)
　　 2.3.1 PDCD5、Survivin的陽(yáng)性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)
　　 在20×10高倍視野下,隨機(jī)選取5個(gè)有陽(yáng)性細(xì)胞存在的視野進(jìn)行計(jì)數(shù),每個(gè)視野計(jì)數(shù)1

4、00個(gè)細(xì)胞,共500個(gè)細(xì)胞。PDCD5以細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒,Survivin以胞漿／胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒計(jì)為陽(yáng)性細(xì)胞。判定方法:(1)按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)評(píng)分:0分:0％,1分:<10％,2分:10％～50％,3分:>50％。(2)按細(xì)胞染色深淺評(píng)分:無棕黃色顆粒,與背景無區(qū)別為0分；有棕黃色顆粒,明顯高于背景底色為1分；有染色較清晰的棕黃色顆粒,介于強(qiáng)弱之間為2分；有大量的深棕色顆粒,染色強(qiáng)為3分。綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)

5、進(jìn)行判定,即(1)+(2):最后得分≥4分為陽(yáng)性表達(dá)(+),<4分為陰性表達(dá)(一)。
　　 2.3.2凋亡細(xì)胞的陽(yáng)性結(jié)果判定及凋亡指數(shù)AI的計(jì)算
　　 用TUNEL法對(duì)凋亡細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),所測(cè)得的凋亡細(xì)胞為細(xì)胞核染成棕黃色的細(xì)胞。凋亡指數(shù)AI的計(jì)算:在40×10高倍視野下隨機(jī)選取10個(gè)視野觀察,計(jì)算凋亡細(xì)胞與所計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)的比值,即AI=凋亡細(xì)胞數(shù)／細(xì)胞總數(shù)×100％。
　　 2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 實(shí)驗(yàn)數(shù)

6、據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。統(tǒng)計(jì)方法:卡方檢驗(yàn),卡方檢驗(yàn)的連續(xù)性校正,配對(duì)資料的關(guān)聯(lián)性分析及直線相關(guān)分析,以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 3結(jié)果：
　　 3.1 PDCD5在正常肺組織和NSCLC組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系
　　 PDCD5主要表達(dá)于正常肺組織上皮細(xì)胞,NSCLC細(xì)胞胞漿也有表達(dá),但染色強(qiáng)度明顯弱于正常肺組織,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)也明顯少于正常肺組織,染色為淺黃色至棕黃色。60例NS

7、CLC組織中PDCD5的陽(yáng)性表達(dá)率為25.0％(15／60),20例正常肺組織的陽(yáng)性表達(dá)率為70.0％(14／20),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=13.144,P=0.000)。PDCD5在NSCLC高分化組中的陽(yáng)性表達(dá)率為60.0％,中、低分化組的陽(yáng)性表達(dá)率為18.0％,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=5.760,P=0.016)。TNM分期Ⅰ、Ⅱ期的陽(yáng)性表達(dá)率為38.9％,Ⅲ、Ⅳ期的陽(yáng)性表達(dá)率為4.2％,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=9.259,P=

8、0.002)。PDCD5在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC患者中的陽(yáng)性表達(dá)率為3.7％,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽(yáng)性表達(dá)率為42.4％,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=11.874,P=0.001)。PDCD5的表達(dá)與NSCLC患者的年齡、性別、腫瘤直徑、病理分型、是否吸煙及有無胸膜轉(zhuǎn)移無關(guān)。
　　 3.2 Survivin在正常肺組織和NSCLC組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系
　　 Survivin主要定位于胞漿或胞核。60例NSCLC組

9、織中Survivin的陽(yáng)性表達(dá)率為46.7％(28／60),20例正常肺組織的陽(yáng)性表達(dá)率為10.0％(2／20),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=8.604,P=0.003)。Survivin在NSCLC高分化組中的陽(yáng)性表達(dá)率為10.0％,中、低分化組陽(yáng)性表達(dá)率為54.0％,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.835,P=0.028)。TNM分期Ⅰ、Ⅱ期的陽(yáng)性表達(dá)率為33.3％,Ⅲ、Ⅳ期的陽(yáng)性表達(dá)率為66.7％,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=6.429,P=

10、0.011)。Survivin在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC患者中的陽(yáng)性表達(dá)率為74.1％,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽(yáng)性表達(dá)率為24.2％,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=14.816,P=0.000)。Survivin的表達(dá)與NSCLC患者的年齡、性別、腫瘤直徑、病理分型、是否吸煙及有無胸膜轉(zhuǎn)移無關(guān)。
　　 3.3 NSCLC組織中PDCD5和Survivin表達(dá)的相關(guān)性
　　 配對(duì)資料的關(guān)聯(lián)性分析得出,PDCD5和Survivin在NSC

11、LC組織中的表達(dá)存在關(guān)聯(lián)性,為負(fù)相關(guān)(x2=8.929,P=0.003,r=-0.386)。
　　 3.4 PDCD5、Survivin與細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系
　　 直線相關(guān)分析得出,PDCD5積分與凋亡指數(shù)AI成正相關(guān)(r=0.663,P=0.000),Survivin積分與凋亡指數(shù)AI成負(fù)相關(guān)(r=-0.736,P=0.000)。
　　 4結(jié)論：
　　 1、PDCD5、Survivin基因的異常表達(dá)可能