血管生成素-1基因轉(zhuǎn)染對人胃癌細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：探討人血管生成素-1(angiopoietin-1，Angl)對胃癌細胞MGC-803增殖與凋亡的影響，并進一步研究其生物學(xué)作用及其在腫瘤發(fā)生中的作用機制。 方法：以人胚腎293細胞對重組質(zhì)粒Ad-Ang1和Ad-GFP進行包裝、擴增和純化并行TCID<,50>滴度檢測后以不同感染復(fù)數(shù)(MOI)的對照病毒Ad-GFP感染MGC-803細胞，根據(jù)綠色熒光蛋白的表達情況計算轉(zhuǎn)染效率，以選擇最適感染復(fù)數(shù)的對照病毒Ad-GFP和重

2、組病毒Ad-Ang1感染胃癌細胞，應(yīng)用MTT比色法分析Ang1對該胃癌細胞增殖的影響，通過流式細胞儀分析血漿饑餓時對其凋亡的影響，并通過RT-PCR、Western Blot及免疫細胞化學(xué)法檢測Ang1、Tie-2及Bcl-2的表達情況。 結(jié)果：成功包裝、擴增及純化了對照病毒Ad-GFP和重組腺病毒Ad-Ang1，其感染滴度分別為2.0×10<'12>pfu/L和1.15×10<'13>pfu/L。當(dāng)感染復(fù)數(shù)(MOI)為20時轉(zhuǎn)

3、染效率即接近100％，而細胞形態(tài)無明顯改變。MTT結(jié)果顯示24，48，72小時Ad-Ang1組吸光度均明顯高于Ad-GFP組及對照組(P<0.05)，而Ad-GFP組與對照組相比無顯著性差異(P>0.05)；流式細胞儀檢測顯示對照組、Ad-GFP組和Ad-Ang1組的凋亡率(％)分別為：5.50±0.75，5.07±0.97，2.4±0.30；免疫細胞化學(xué)結(jié)果顯示3組細胞均有不同程度Ang-1及其受體Tie-2的表達，且Ad-Ang1組