芹菜素和TRAIL聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人胃癌細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　研究芹菜素(apigenin, API)是否具有增強(qiáng)腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)誘導(dǎo)人胃癌BGC-823細(xì)胞凋亡作用以及其作用機(jī)制是否涉及耗竭細(xì)胞谷胱甘肽(glutathione, GSH)。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)人胃癌BGC-823細(xì)胞和人永生化胃粘膜GES-1細(xì)胞; MTS比色法測(cè)定細(xì)胞活性;碘化丙啶(pro

2、pidium iodide, PI)染色流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM)分析細(xì)胞凋亡率;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)測(cè)定細(xì)胞天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-containing aspartate-specific proteases, caspase-3)活性;分光光度法(spectrophotometry)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi) GS

3、H含量;異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)標(biāo)記死亡受體-5(Death receptor5, DR5)抗體FCM分析細(xì)胞DR5表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　MTS比色法測(cè)定結(jié)果顯示:單用API(10、20μmol/L)以及單用TRAIL(10.0、100ng/mL)作用24 h,抑制BGC-823細(xì)胞活性作用微弱,與溶媒對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義。20μmol/L API預(yù)孵

4、育1 h, TRAIL(10、100、1000ng/mL)作用24 h,抑制BGC-823細(xì)胞活性作用顯著增強(qiáng)(P<0.05),呈濃度依賴性;然而,兩者合用對(duì)GES-1細(xì)胞活性抑制作用微弱。PI染色FCM分析結(jié)果表明:單用20.0μmol/L API和100 ng/mL TRAIL以及兩者合用處理24 h,BGC-823細(xì)胞的凋亡率分別為4.46±0.56％、5.18±0.40%和32.2±3.82%;GES-1細(xì)胞的凋亡率分別是4.1

5、4±0.23%、4.07±0.23%和4.50±0.32%。ELISA測(cè)定細(xì)胞caspase-3活性結(jié)果發(fā)現(xiàn):在BGC-823細(xì)胞系,20.0μmol/L API和100 ng/mL TRAIL合用顯著誘導(dǎo)caspase-3激活(P<0.05),caspase-3特異抑制劑(10μmol/L Ac-DEVD-CHO)能有效阻斷兩者合用誘導(dǎo) caspase-3活化作用(P<0.05);在GES-1細(xì)胞系,20.0μmol/L API和10

6、0 ng/mL TRAIL無(wú)論單用亦或合用對(duì)細(xì)胞caspase-3活性無(wú)明顯影響。分光光度法(spectrophotometry)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi) GSH含量結(jié)果證明:在20μmol/L~40.0μmol/L濃度范圍內(nèi),API以濃度依賴方式降低BGC-823細(xì)胞內(nèi)GSH含量(P<0.05);而對(duì)GES-1細(xì)胞內(nèi)GSH含量無(wú)明顯影響。FITC標(biāo)記抗DR5抗體的FCM分析顯示:API(20.0μmol/L、40.0μmol/L)上調(diào)BGC-823

7、細(xì)胞 DR5表達(dá),呈濃度依賴性(P<0.05);在 GES-1細(xì)胞系中,API無(wú)此作用。另外,添加外源性GSH(500μmol/L GSH預(yù)孵育1 h)能夠有效拮抗API降低BGC-823細(xì)胞內(nèi) GSH含量和上調(diào) DR5蛋白表達(dá)以及亞毒性 API和TRAIL合用抑制細(xì)胞活性、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和激活caspase-3作用(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.亞毒性濃度的API具有增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)人胃癌BGC-823細(xì)胞凋亡作用