常溫體外循環(huán)對大鼠海馬BDNFmRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過建立大鼠體外循環(huán)(CPB)模型，觀察常溫體外循環(huán)對大鼠海馬神經(jīng)元凋亡及腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)mRNA表達(dá)的影響。 方法：選擇成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠20只，隨機(jī)分為體外循環(huán)組(CPB組，n=10)和假手術(shù)組(Sham組，n=10)。兩組動(dòng)物麻醉(10％水合氯醛350mg·kg-1肌注)后經(jīng)口氣管插管并進(jìn)行機(jī)械通氣，經(jīng)右側(cè)上腔靜脈置入右心房插管及經(jīng)尾動(dòng)脈置入動(dòng)脈灌注管，肝素抗凝(500U·

2、kg-1)。CPB組采用常溫CPB(37.8℃～38.7℃)，經(jīng)右側(cè)上腔靜脈腔房引流、尾動(dòng)脈灌注，灌注流量為(120～150)mL·kg-1·min-1，總轉(zhuǎn)流時(shí)間60min；Sham組除不經(jīng)歷CPB外，其余操作與CPB組相同。實(shí)驗(yàn)中監(jiān)測體溫和血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，檢測動(dòng)脈血?dú)狻㈦娊赓|(zhì)和血液稀釋度指標(biāo)。Sham組于術(shù)后3h、CPB組于停機(jī)后2h處死動(dòng)物，立即斷頭取腦分離海馬組織，左側(cè)海馬放入-70℃液氮罐保存以供BDNFmRNA檢測，右側(cè)海馬

3、放入4％多聚甲醛溶液保存以供電鏡觀察。BDNFmRNA檢測采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)的方法。 結(jié)果：1.兩組動(dòng)物的生理指標(biāo)和實(shí)驗(yàn)經(jīng)過：20.只大鼠均安全度過外科動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程。兩組動(dòng)物各項(xiàng)生理指標(biāo)的基礎(chǔ)值無明顯差別(p>0.05)。各個(gè)時(shí)間點(diǎn)中兩組的體溫(T)、心率(HR)、電解質(zhì)(Na+、K+、iCa2+)等指標(biāo)無明顯差異(P>0.05)。CPB組轉(zhuǎn)流中及停機(jī)后平均動(dòng)脈壓(MAP)、中心靜脈壓(CVP)、動(dòng)脈血二氧

4、化碳分壓(PaCO2)、動(dòng)脈血氧分壓(PaO2)、紅細(xì)胞壓積(Hct)、血紅蛋白含量(Hb)等指標(biāo)變化較明顯(P<0.05)，表現(xiàn)為MAP降低、CVP升高、PaCO2升高、PaO2降低、Hct及Hb降低，符合臨床CPB的病理生理變化。2.海馬的電鏡超微結(jié)構(gòu)：Sham組海馬神經(jīng)元基本正常，線粒體形態(tài)正常，嵴清晰可見，核旁粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富，并可見核糖體附著，偶爾可見血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹。CPB組海馬的神經(jīng)元腫脹、凋亡，核固縮、出現(xiàn)空泡區(qū)、核常染色

5、體消失，核膜斷裂、消失，胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器減少、消失，線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)溶解，血管內(nèi)皮細(xì)胞明顯腫脹。3.海馬BDNFmRNA的表達(dá)：RT-PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物電泳圖中CPB組的bdnf電泳條帶明亮、清晰，Sham組的bdnf電泳條帶暗淡、模糊，兩組β-actin電泳條帶的寬度和亮度差別不大。經(jīng)凝膠成像分析系統(tǒng)計(jì)算結(jié)果顯示，CPB組的bdnf/β-actin比值大于Sham組(P<0.05)，表明CPB組海馬BDNFmRNA表達(dá)高于Sham組。