常溫體外循環(huán)對大鼠海馬c-fos基因表達的影響.pdf

1、目的:通過建立大鼠體外循環(huán)模型（CPB），觀察常溫體外循環(huán)對大鼠海馬神經(jīng)元即早基因c-fos基因表達的影響。
　　方法：成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠12只，隨機分為假手術組（Sham組， n=6），體外循環(huán)組（CPB組，n=6）。兩組動物麻醉（10％水合氯醛，350 mg·kg-1腹腔注射）后經(jīng)口氣管插管并行機械通氣，經(jīng)右側(cè)上腔靜脈置入右心房插管及經(jīng)右側(cè)頸內(nèi)動脈置入動脈灌注管，肝素抗凝（500U·kg-1）。C

2、PB組采用常溫（36℃以上），經(jīng)右側(cè)上腔靜脈右心房引流，右頸內(nèi)動脈灌注，灌注流量為（120～150） mL·kg-1·min-1，總轉(zhuǎn)流時間60min；Sham組除了不經(jīng)歷CPB外，其余操作與CPB組相同；實驗過程中檢測體溫、動脈壓、動脈血氣、電解質(zhì)和血液稀釋度。CPB組于停機后1h、Sham組于手術后2h處死動物，立即斷頭取腦分離海馬組織，左側(cè)海馬放入液氮速凍后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存以供c-fos mRNA檢測，右側(cè)海馬放入4%多聚甲醛

3、保存以供免疫組織化學方法檢測。c-fos檢測采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）的方法。
　　結果：1.兩組動物生理指標和實驗經(jīng)過：12只大鼠均安全度過外科實驗動物過程。各個時間點的兩組大鼠的體重、及血氣分析指標無明顯變化（P>0.05），CPB轉(zhuǎn)流中及停機后K+、Ca2+、HCT、THbc等指標變化較明顯（P<0.05），表現(xiàn)為K+、Ca2+、HCT、THbc降低。2.海馬HE染色觀察Sham組神經(jīng)細胞數(shù)量及形態(tài)結構分布正常

4、，椎體細胞呈橢圓形，核仁清楚，未見明顯病理學改變；CPB組可見神經(jīng)元腫脹，出現(xiàn)核固縮和（或）核碎裂的萎縮神經(jīng)元。3.Sham組海馬 c-fos僅有少量表達，陽性細胞染色較淺；CPB組大鼠海馬c-fos呈高水平表達，染色深，神經(jīng)元結構清晰，完整，陽性物質(zhì)均位于胞核內(nèi)。4.CPB組的c-fos電泳條帶變焦明亮清晰，Sham組的c-fos條帶卻模糊、暗淡CPB組的c-fos/β-action比值大于Sham組（P<0.05），表明CPB組海馬