淋巴瘀滯對(duì)家兔胰肝腎組織結(jié)構(gòu)和功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、糖尿病(diabetes mellitus,DM)是一種由于胰島素分泌絕對(duì)或相對(duì)不足,或著胰島素作用缺陷而導(dǎo)致的以高血糖為特征的內(nèi)分泌和代謝疾病。其中,以2型糖尿病(type2 diabetes mellitus,T2DM)的發(fā)病率最高,約占糖尿病患者的95％以上。為了深入探討T2DM的發(fā)病機(jī)制,國內(nèi)外學(xué)者利用動(dòng)物模型進(jìn)行了大量的研究工作。糖尿病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立有多種方法,判斷造模是否成功的指標(biāo)主要是血糖和尿糖。
　　 淋巴系

2、統(tǒng)(lymphatic system)是循環(huán)系統(tǒng)的重要組成部分,由淋巴管道、淋巴器官和淋巴組織組成。在大分子物質(zhì)(如長(zhǎng)鏈脂肪酸、蛋白和多肽激素)的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn),炎癥擴(kuò)散和腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移等諸多生理及病理過程中,發(fā)揮極其重要的作用。
　　 胰島素為多肽激素,由胰島B細(xì)胞分泌入組織間隙后的轉(zhuǎn)運(yùn)途徑,目前尚存在爭(zhēng)議。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為,胰島素進(jìn)入毛細(xì)血管,直接通過血液轉(zhuǎn)運(yùn)。在生理狀況下,除了通過血管系統(tǒng)之外,胰島素是否還存在淋巴轉(zhuǎn)運(yùn)途徑呢?有許多

3、研究報(bào)道指出,在不同實(shí)驗(yàn)對(duì)象的胸導(dǎo)管淋巴液中存在胰島素。這些研究結(jié)論提示:胰島素被分泌入組織液后,胰腺的淋巴系統(tǒng)可能是生理狀態(tài)下胰島素的重要轉(zhuǎn)運(yùn)途徑。如果胰島素通過淋巴管道轉(zhuǎn)運(yùn),繼而進(jìn)入體循環(huán)血液,運(yùn)達(dá)全身各處的靶器官、靶組織、靶細(xì)胞發(fā)揮作用,可避免肝臟的“首過效應(yīng)”。關(guān)于胰島素等大分子物質(zhì)的正常轉(zhuǎn)運(yùn)途徑是直接進(jìn)入毛細(xì)血管,還是通過毛細(xì)淋巴管吸收經(jīng)淋巴運(yùn)輸間接進(jìn)入血液,胰淋巴回流受阻是否影響胰島素的轉(zhuǎn)運(yùn),仍需深入研究。同樣,淋巴回流受阻

4、對(duì)肝腎結(jié)構(gòu)和功能的影響也需要進(jìn)一步研究。
　　 本實(shí)驗(yàn)分為五部分,通過腹部手術(shù)結(jié)扎家兔胸導(dǎo)管,造成淋巴回流阻滯的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型;應(yīng)用光鏡和透射電鏡,觀察正常和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胰、肝、腎組織的形態(tài)學(xué)變化;利用生化和放射免疫分析技術(shù),檢測(cè)正常和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血糖、血脂、胰島素、肝功能和腎功能變化;探討淋巴瘀滯對(duì)胰、肝、腎組織結(jié)構(gòu)和功能的影響,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　 第一部分淋巴瘀滯家兔模型的建立及其與2型糖尿病的關(guān)系
　　

5、目的:在腹部手術(shù)結(jié)扎家兔胸導(dǎo)管,造成淋巴回流阻滯,觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹腔及胰腺內(nèi)脂肪堆積情況,檢測(cè)血糖的變化,希望找到一種新的制造2型糖尿病動(dòng)物模型的方法。
　　 方法:(1)選用10月齡家兔20只(由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),雌雄各半,分籠飼養(yǎng),隨機(jī)分為兩組,實(shí)驗(yàn)(手術(shù))組和對(duì)照(假性手術(shù))組;(2)結(jié)扎胸導(dǎo)管前2-3小時(shí),用植物油5～10毫升灌喂家兔,用6％水合氯醛(5 ml/kg)腹腔注射麻醉,在手術(shù)顯微鏡下,對(duì)照組只是充

6、分游離胸導(dǎo)管而不結(jié)扎;模型組在腹部膈腳處充分暴露胸導(dǎo)管,并結(jié)扎造模。術(shù)后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,常規(guī)喂養(yǎng)。(3)術(shù)后6個(gè)月的實(shí)驗(yàn)和對(duì)照動(dòng)物,在6％水合氯醛(5 ml/kg)腹腔注射深度麻醉下,開腹觀察腹部脂肪堆積情況。采取耳梢血測(cè)血糖,測(cè)血糖前禁食12小時(shí),血糖儀為美國強(qiáng)生Lifescan,血糖試紙Uni-Check。
　　 結(jié)論:采用腹部手術(shù)結(jié)扎家兔胸導(dǎo)管的方法,可以建立胰淋巴瘀滯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型;結(jié)扎家兔胸導(dǎo)管的方法可導(dǎo)致腹腔出現(xiàn)大量脂肪沉

7、積,發(fā)生血糖逐漸升高現(xiàn)象,這與臨床2型糖尿病的發(fā)病過程相似。
　　 第二部分結(jié)扎家兔胸導(dǎo)管誘發(fā)胰組織結(jié)構(gòu)變化的形態(tài)學(xué)觀察
　　 目的:探討實(shí)驗(yàn)性淋巴瘀滯對(duì)胰組織細(xì)微和超微結(jié)構(gòu)的影響。
　　 方法:(1)選用10月齡家兔20只,隨機(jī)分為兩組,實(shí)驗(yàn)(手術(shù))組和對(duì)照(假性手術(shù))組;(2)造模后6個(gè)月取材,部分胰組織標(biāo)本做石蠟包埋切片,進(jìn)行HE、剛果紅染色和胰淀肽免疫組織化學(xué)染色光鏡觀察;(3)部分胰腺組織標(biāo)本制備超薄切

8、片,進(jìn)行透射電鏡觀察。
　　 結(jié)論:淋巴瘀滯對(duì)家兔胰組織結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響,如淋巴管擴(kuò)張、結(jié)締組織間隙增寬、脂肪堆積以及胰淀肽沉積形態(tài)學(xué)變化;實(shí)驗(yàn)性淋巴瘀滯誘發(fā)的胰組織結(jié)構(gòu)變化,勢(shì)必會(huì)影響胰腺的外分泌和胰島的內(nèi)分泌功能。
　　 第三部分結(jié)扎家兔胸導(dǎo)管對(duì)肝組織結(jié)構(gòu)和功能影響的觀察
　　 目的:探討實(shí)驗(yàn)性淋巴瘀滯對(duì)肝組織結(jié)構(gòu)和功能的影響。
　　 方法:(1)選用10月齡家兔20只,隨機(jī)分為兩組,模型(手術(shù))組和對(duì)照

9、(假性手術(shù))組;(2)造模后6個(gè)月取材,部分肝組織做石蠟包埋切片,HE和免疫組織化學(xué)染色進(jìn)仃光銳觀察,部分肝組織制作電鏡切片并觀察。(3)術(shù)前和術(shù)后6個(gè)月的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,在6％水合氯醛(6 ml/kg)腹腔注射深度麻醉下,穿刺股靜脈取血,3000轉(zhuǎn)/分離心后取血清,以檢測(cè)肝功能。
　　 結(jié)論:淋巴瘀滯導(dǎo)致肝內(nèi)脂肪的異位儲(chǔ)存,隨著時(shí)間的推移,脂肪肝可進(jìn)一步發(fā)展為脂肪性肝炎、肝纖維化甚至肝硬化;肝淋巴瘀滯可導(dǎo)致肝功能受損。
　　

10、 第四部分結(jié)扎家兔胸導(dǎo)管對(duì)腎組織結(jié)構(gòu)和功能影響的觀察
　　 目的:探討實(shí)驗(yàn)性淋巴瘀滯對(duì)腎組織結(jié)構(gòu)和功能的影響。
　　 方法:(1)選用10月齡家兔20只,隨機(jī)分為兩組,實(shí)驗(yàn)(手術(shù))組和對(duì)照(假性手術(shù))組;(2)造模后6個(gè)月取材,部分腎組織做石蠟包埋切片,HE和免疫組織化學(xué)染色進(jìn)行光鏡觀察,部分腎組織制作電鏡切片并觀察。(3)造模前和造模后6個(gè)月的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,在6％水合氯醛(6 ml/kg)腹腔注射深度麻醉下,穿刺股靜脈取血

11、,3000轉(zhuǎn)/分離心后取血清,以檢測(cè)家兔的腎功能。
　　 結(jié)論:淋巴瘀滯可誘發(fā)腎小球空泡樣變和淀粉樣物質(zhì)沉積;淋巴瘀滯可導(dǎo)致腎功能損壞。
　　 第五部分結(jié)扎胸導(dǎo)管對(duì)家兔脂代謝和糖代謝的影響
　　 目的:探討實(shí)驗(yàn)性淋巴瘀滯對(duì)糖代謝和脂質(zhì)代謝影響
　　 方法:(1)選用10月齡家兔20只,隨機(jī)分為兩組,實(shí)驗(yàn)(手術(shù))組和對(duì)照(假性手術(shù))組;(2)造模前檢測(cè)正常和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血糖、血脂、胰島素;(3)造模后,每周空