淋巴瘀滯對家兔胰肝腎組織結構和功能影響的實驗研究.pdf

1、糖尿病(diabetes mellitus,DM)是一種由于胰島素分泌絕對或相對不足,或著胰島素作用缺陷而導致的以高血糖為特征的內分泌和代謝疾病。其中,以2型糖尿病(type2 diabetes mellitus,T2DM)的發(fā)病率最高,約占糖尿病患者的95％以上。為了深入探討T2DM的發(fā)病機制,國內外學者利用動物模型進行了大量的研究工作。糖尿病實驗動物模型的建立有多種方法,判斷造模是否成功的指標主要是血糖和尿糖。
　　 淋巴系

2、統(lymphatic system)是循環(huán)系統的重要組成部分,由淋巴管道、淋巴器官和淋巴組織組成。在大分子物質(如長鏈脂肪酸、蛋白和多肽激素)的吸收和轉運,炎癥擴散和腫瘤細胞轉移等諸多生理及病理過程中,發(fā)揮極其重要的作用。
　　 胰島素為多肽激素,由胰島B細胞分泌入組織間隙后的轉運途徑,目前尚存在爭議。多數學者認為,胰島素進入毛細血管,直接通過血液轉運。在生理狀況下,除了通過血管系統之外,胰島素是否還存在淋巴轉運途徑呢?有許多

3、研究報道指出,在不同實驗對象的胸導管淋巴液中存在胰島素。這些研究結論提示:胰島素被分泌入組織液后,胰腺的淋巴系統可能是生理狀態(tài)下胰島素的重要轉運途徑。如果胰島素通過淋巴管道轉運,繼而進入體循環(huán)血液,運達全身各處的靶器官、靶組織、靶細胞發(fā)揮作用,可避免肝臟的“首過效應”。關于胰島素等大分子物質的正常轉運途徑是直接進入毛細血管,還是通過毛細淋巴管吸收經淋巴運輸間接進入血液,胰淋巴回流受阻是否影響胰島素的轉運,仍需深入研究。同樣,淋巴回流受阻

4、對肝腎結構和功能的影響也需要進一步研究。
　　 本實驗分為五部分,通過腹部手術結扎家兔胸導管,造成淋巴回流阻滯的實驗動物模型;應用光鏡和透射電鏡,觀察正常和實驗動物的胰、肝、腎組織的形態(tài)學變化;利用生化和放射免疫分析技術,檢測正常和實驗動物的血糖、血脂、胰島素、肝功能和腎功能變化;探討淋巴瘀滯對胰、肝、腎組織結構和功能的影響,實驗內容和結果如下:
　　 第一部分淋巴瘀滯家兔模型的建立及其與2型糖尿病的關系
　　

5、目的:在腹部手術結扎家兔胸導管,造成淋巴回流阻滯,觀察實驗動物腹腔及胰腺內脂肪堆積情況,檢測血糖的變化,希望找到一種新的制造2型糖尿病動物模型的方法。
　　 方法:(1)選用10月齡家兔20只(由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供),雌雄各半,分籠飼養(yǎng),隨機分為兩組,實驗(手術)組和對照(假性手術)組;(2)結扎胸導管前2-3小時,用植物油5～10毫升灌喂家兔,用6％水合氯醛(5 ml/kg)腹腔注射麻醉,在手術顯微鏡下,對照組只是充

6、分游離胸導管而不結扎;模型組在腹部膈腳處充分暴露胸導管,并結扎造模。術后的實驗動物,常規(guī)喂養(yǎng)。(3)術后6個月的實驗和對照動物,在6％水合氯醛(5 ml/kg)腹腔注射深度麻醉下,開腹觀察腹部脂肪堆積情況。采取耳梢血測血糖,測血糖前禁食12小時,血糖儀為美國強生Lifescan,血糖試紙Uni-Check。
　　 結論:采用腹部手術結扎家兔胸導管的方法,可以建立胰淋巴瘀滯實驗動物模型;結扎家兔胸導管的方法可導致腹腔出現大量脂肪沉

7、積,發(fā)生血糖逐漸升高現象,這與臨床2型糖尿病的發(fā)病過程相似。
　　 第二部分結扎家兔胸導管誘發(fā)胰組織結構變化的形態(tài)學觀察
　　 目的:探討實驗性淋巴瘀滯對胰組織細微和超微結構的影響。
　　 方法:(1)選用10月齡家兔20只,隨機分為兩組,實驗(手術)組和對照(假性手術)組;(2)造模后6個月取材,部分胰組織標本做石蠟包埋切片,進行HE、剛果紅染色和胰淀肽免疫組織化學染色光鏡觀察;(3)部分胰腺組織標本制備超薄切

8、片,進行透射電鏡觀察。
　　 結論:淋巴瘀滯對家兔胰組織結構產生影響,如淋巴管擴張、結締組織間隙增寬、脂肪堆積以及胰淀肽沉積形態(tài)學變化;實驗性淋巴瘀滯誘發(fā)的胰組織結構變化,勢必會影響胰腺的外分泌和胰島的內分泌功能。
　　 第三部分結扎家兔胸導管對肝組織結構和功能影響的觀察
　　 目的:探討實驗性淋巴瘀滯對肝組織結構和功能的影響。
　　 方法:(1)選用10月齡家兔20只,隨機分為兩組,模型(手術)組和對照

9、(假性手術)組;(2)造模后6個月取材,部分肝組織做石蠟包埋切片,HE和免疫組織化學染色進仃光銳觀察,部分肝組織制作電鏡切片并觀察。(3)術前和術后6個月的實驗動物,在6％水合氯醛(6 ml/kg)腹腔注射深度麻醉下,穿刺股靜脈取血,3000轉/分離心后取血清,以檢測肝功能。
　　 結論:淋巴瘀滯導致肝內脂肪的異位儲存,隨著時間的推移,脂肪肝可進一步發(fā)展為脂肪性肝炎、肝纖維化甚至肝硬化;肝淋巴瘀滯可導致肝功能受損。
　　

10、 第四部分結扎家兔胸導管對腎組織結構和功能影響的觀察
　　 目的:探討實驗性淋巴瘀滯對腎組織結構和功能的影響。
　　 方法:(1)選用10月齡家兔20只,隨機分為兩組,實驗(手術)組和對照(假性手術)組;(2)造模后6個月取材,部分腎組織做石蠟包埋切片,HE和免疫組織化學染色進行光鏡觀察,部分腎組織制作電鏡切片并觀察。(3)造模前和造模后6個月的實驗動物,在6％水合氯醛(6 ml/kg)腹腔注射深度麻醉下,穿刺股靜脈取血

11、,3000轉/分離心后取血清,以檢測家兔的腎功能。
　　 結論:淋巴瘀滯可誘發(fā)腎小球空泡樣變和淀粉樣物質沉積;淋巴瘀滯可導致腎功能損壞。
　　 第五部分結扎胸導管對家兔脂代謝和糖代謝的影響
　　 目的:探討實驗性淋巴瘀滯對糖代謝和脂質代謝影響
　　 方法:(1)選用10月齡家兔20只,隨機分為兩組,實驗(手術)組和對照(假性手術)組;(2)造模前檢測正常和實驗動物的血糖、血脂、胰島素;(3)造模后,每周空