益肺方治療非小細(xì)胞肺癌的作用機(jī)制研究.pdf

1、本文從理論研究，實(shí)驗(yàn)研究?jī)煞矫?，?duì)益肺方治療非小細(xì)胞肺癌的立法依據(jù)以及細(xì)胞和分子生物學(xué)機(jī)制進(jìn)行探討。 理論研究方面，首先進(jìn)行文獻(xiàn)研究，對(duì)近年來關(guān)于原發(fā)性支氣管肺癌特別是非小細(xì)胞肺癌的中西醫(yī)臨床研究進(jìn)行整理，闡述了非小細(xì)胞肺癌的治療現(xiàn)狀和研究進(jìn)展。在此基礎(chǔ)上，根據(jù)導(dǎo)師的臨床經(jīng)驗(yàn)和學(xué)術(shù)思想，圍繞益肺方益氣養(yǎng)陰解毒的立法依據(jù)進(jìn)行深入探討，闡明了氣陰兩虛是肺癌發(fā)病基礎(chǔ)并貫穿疾病的始終，痰瘀毒結(jié)是中晚期肺癌病理變化的主要環(huán)節(jié)，益氣養(yǎng)陰解毒

2、是治肺癌之本為中晚期肺癌的重要治法。指出益氣養(yǎng)陰解毒法作為運(yùn)用于肺癌的重要治法，是以臨床療效為基礎(chǔ)，在辯證求因、審因論治學(xué)術(shù)思想指導(dǎo)下，依據(jù)肺癌的發(fā)病原因、病理環(huán)節(jié)及其作用機(jī)理而確立的，符合中醫(yī)學(xué)整體觀念、辨證論治基本理論和治病求本的基本原則，對(duì)臨床治療有重要的指導(dǎo)作用。 實(shí)驗(yàn)研究方面，針對(duì)益肺方治療非小細(xì)胞肺癌的作用機(jī)制進(jìn)行了多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。方法：（1）四甲基偶氮唑藍(lán)（MIT）顯色法，觀察益肺方對(duì)人肺癌細(xì)胞株A549的生長(zhǎng)抑制作用；

3、（2）AO/EB染色，觀察人肺癌細(xì)胞株A549的細(xì)胞形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)的改變及對(duì)凋亡的影響；（3）PCR基因芯片，檢測(cè)益肺方對(duì)人肺癌A549細(xì)胞在腫瘤相關(guān)生物學(xué)通路基因表達(dá)的影響，分析其誘發(fā)基因譜改變的特征生物學(xué)通路；（4）Real-time Quantitative PCR Detecting System（qPCR），驗(yàn)證益肺方對(duì)特征生物學(xué)通路上血管生成相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控作用，探討其抗腫瘤作用的分子機(jī)制。結(jié)果：（1）MTI法：益肺方在

4、體外對(duì)人肺癌A549細(xì)胞有明顯的抑制作用，且這種抑制作用呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴性；（2）形態(tài)學(xué)觀察：AO/EB染色顯示益肺方作用于A549腫瘤細(xì)胞后，給藥組早期凋亡細(xì)胞略多于空白對(duì)照組，隨劑量增高，晚期凋亡細(xì)胞和死亡細(xì)胞也增多。（3）基因芯片：實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較在檢測(cè)的89個(gè)基因中有8條基因表達(dá)水平顯著上調(diào)，22條基因表達(dá)水平顯著下調(diào)。差異表達(dá)基因主要與血管生成、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞衰老、侵襲轉(zhuǎn)移、信號(hào)傳導(dǎo)等有關(guān)。（4）qPCR：與對(duì)照組相比，不

5、同藥物濃度實(shí)驗(yàn)組中的A549細(xì)胞中的VEGF、IL8、COX-2的表達(dá)水平均有不同程度的下調(diào)，并呈一定的量效關(guān)系，而其中COX-2且隨給藥濃度降低，有上調(diào)趨勢(shì)，而IFNA基因在藥物濃度為5mg/ml條件下表達(dá)水平顯著上升，其余兩組皆表達(dá)水平明顯下調(diào)。分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，證實(shí)益肺方具有抑制人肺癌A549細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡的作用，提示益肺方通過調(diào)控血管生成、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞衰老、侵襲轉(zhuǎn)移、信號(hào)傳導(dǎo)等多條腫瘤相關(guān)生物學(xué)通路的基因水平，從而影響肺癌的