氨甲喋呤對映體對急性淋巴細胞白血病細胞株的體外誘導蛋白表達差異的研究.pdf

1、目的：
　　建立耐甲氨蝶呤（MTX）對映體的人白血病細胞株CCRF-CEM和BALL-1細胞株，分析在加藥前后蛋白表達的差異性。
　　方法：
　　采用低劑量誘導結合濃度遞增的方法來建立MTX對映體誘導的兩株親本細胞的耐藥細胞株，并且用倒置顯微鏡來觀察在MTX對映體作用前后CCFR-CEM和BALL-1細胞株形態(tài)學變化和活性的差異。采用雙向凝膠電泳技術來對MTX對映體作用后耐藥細胞株與親本細胞株的總蛋白進行分離，用凝膠掃

2、描儀來進行對比找出差異蛋白點，結合質(zhì)譜分析儀和數(shù)據(jù)庫信息檢索來鑒定差異蛋白點。
　　結果：
　　在蛋白定量上：CCRF-CEM，D-(-)MTX-CCRF-CEM，L-(+)-MTX-CCRF-CEM，BALL-1，D-(-)MTX-BALL-1，L-(+)-MTX-BALL-1的結果分別是36.17mg/ml,38.54mg/ml,41.09mg/ml,37.28mg/ml；作為親本細胞的對照組CCRF-CEM和BALL-

3、1檢測到的平均蛋白點數(shù)分別為295?14和421?12個，平均蛋白點的匹配百分率為82.57％和85.13%。而加入藥物的的實驗組D-(-)MTX-CCRF-CEM，L-(+)-MTX-CCRF-CEM，D-(-)MTX-BALL-1，L-(+)-MTX-BALL-1檢測到的平均蛋白點數(shù)分別為31610，3029,44511，4327個，平均蛋白點的匹配百分率為85.27%，84.72%，86.89%，89.35%。設定蛋白點體積差異倍

4、數(shù)>2倍以上為差異有統(tǒng)計學意義。與CCRF-CEM比較，D-(-)MTX-CCRF-CEM有15個差異明顯的蛋白點，而L-(+)-MTX-CCRF-CEM中6個差異明顯的蛋白點，有4個在實驗組中表達，而另外兩個是實驗組不表達而對照組表達。與BALL-1相比較，D-(-)-MTX-BALL-1有17個差異明顯的蛋白點在實驗組中高表達，而L-(+)-MTX-CCRF-CEM則有12個差異明顯的蛋白點，其中有10是實驗組高表達，另外兩個蛋白點