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文檔簡介
1、目的:
建立耐甲氨蝶呤(MTX)對映體的人白血病細胞株CCRF-CEM和BALL-1細胞株,分析在加藥前后蛋白表達的差異性。
方法:
采用低劑量誘導結合濃度遞增的方法來建立MTX對映體誘導的兩株親本細胞的耐藥細胞株,并且用倒置顯微鏡來觀察在MTX對映體作用前后CCFR-CEM和BALL-1細胞株形態(tài)學變化和活性的差異。采用雙向凝膠電泳技術來對MTX對映體作用后耐藥細胞株與親本細胞株的總蛋白進行分離,用凝膠掃
2、描儀來進行對比找出差異蛋白點,結合質(zhì)譜分析儀和數(shù)據(jù)庫信息檢索來鑒定差異蛋白點。
結果:
在蛋白定量上:CCRF-CEM,D-(-)MTX-CCRF-CEM,L-(+)-MTX-CCRF-CEM,BALL-1,D-(-)MTX-BALL-1,L-(+)-MTX-BALL-1的結果分別是36.17mg/ml,38.54mg/ml,41.09mg/ml,37.28mg/ml;作為親本細胞的對照組CCRF-CEM和BALL-
3、1檢測到的平均蛋白點數(shù)分別為295?14和421?12個,平均蛋白點的匹配百分率為82.57%和85.13%。而加入藥物的的實驗組D-(-)MTX-CCRF-CEM,L-(+)-MTX-CCRF-CEM,D-(-)MTX-BALL-1,L-(+)-MTX-BALL-1檢測到的平均蛋白點數(shù)分別為31610,3029,44511,4327個,平均蛋白點的匹配百分率為85.27%,84.72%,86.89%,89.35%。設定蛋白點體積差異倍
4、數(shù)>2倍以上為差異有統(tǒng)計學意義。與CCRF-CEM比較,D-(-)MTX-CCRF-CEM有15個差異明顯的蛋白點,而L-(+)-MTX-CCRF-CEM中6個差異明顯的蛋白點,有4個在實驗組中表達,而另外兩個是實驗組不表達而對照組表達。與BALL-1相比較,D-(-)-MTX-BALL-1有17個差異明顯的蛋白點在實驗組中高表達,而L-(+)-MTX-CCRF-CEM則有12個差異明顯的蛋白點,其中有10是實驗組高表達,另外兩個蛋白點
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