兒童急性淋巴細胞白血病細胞差異蛋白質組學分析.pdf

1、研究目的:
　　 通過差異蛋白質組學技術比較獲得初診急性淋巴細胞白血病(ALL)患兒白血病細胞與健康兒童白細胞表達蛋白質譜之間的差異蛋白,為深入研究兒童ALL發(fā)生發(fā)展機制、探索新的診療途徑提供依據(jù)。
　　 研究對象與方法:
　　 1.分別留取15例初診ALL患兒的骨髓細胞(原始+幼稚淋巴細胞比率>90％)為實驗組與15例正常健康體檢兒童外周血細胞為正常對照組,ALL患兒均經(jīng)骨髓細胞學檢查與免疫學分型檢查確診,且無

2、多系增生現(xiàn)象。
　　 2.用淋巴細胞分離液獲取兩組單個核細胞標本并裂解獲得其內表達的蛋白質,進行雙向凝膠電泳(2-DE),保證每例樣本有3次獨立重復試驗。
　　 3.掃描獲得凝膠圖像,應用ImageMaster2D Platinum7.0 Training軟件,根據(jù)體積差異倍數(shù)≥2及Anova P<0.05設置軟件檢測標準,分析獲得兩組差異蛋白點。
　　 4.手工切點進行膠內酶切獲取蛋白肽段,進行MALDI-TO

3、F-MS質譜分析,連接IPI_human human_v3.07數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質。
　　 結果:
　　 1.實驗組與正常對照組分別檢測到(889±52)、(834±41)個蛋白點。比較獲得實驗組較正常對照組有4個高表達蛋白點和11個低表達蛋白點,等電點多在pH4.5～7之間,分子質量集中在18.4～45KD范圍內。
　　 2.質譜分析、數(shù)據(jù)庫鑒定獲得2個高表達蛋白Glutathione S-transferase

4、 P(谷胱甘肽S轉移酶P)、Prohibitin(抑制素)及6個低表達蛋白60S acidicribosomal protein P0(60S酸性核糖體蛋白PO)、Pyridoxine-5'-phosphateoxidase(磷酸吡哆醇氧化酶)、Triosephosphate isomerase1 variant(磷酸甘油醛異構酶-1)、Peroxiredoxin4(過氧化還原酶4)、Actin,cytoplasmic(細胞質肌動蛋白)

5、、Hypothetical protein FLJ26567(假設蛋白FLJ26567)。
　　 結論:
　　 1.ALL患兒與健康兒童細胞內蛋白表達存在明顯差異,并鑒定獲得8種差異蛋白,與兒童ALL的發(fā)生發(fā)展有關。其中谷胱甘肽轉移酶P、細胞質肌動蛋白與兒童ALL的關系與既往非蛋白質組學研究其與白血病的關系結果相似,抑制素、60s酸性核糖體蛋白PO、磷酸吡哆醇氧化酶、磷酸甘油醛異構酶-1、過氧化還原酶4與假設蛋白FLJ2