流體切應(yīng)力調(diào)控成骨細(xì)胞周期G1-S點(diǎn)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討流體切應(yīng)力(FSS)促成骨細(xì)胞增殖，分化作用以及細(xì)胞周期從G1期向S期轉(zhuǎn)化機(jī)制的關(guān)系，為確立最佳生理應(yīng)力刺激骨再生提供依據(jù)。 方法：從KM乳鼠顱蓋骨提取原代成骨細(xì)胞，在體外流體小室內(nèi)分別受FSS(12dyn/c㎡)作用0、0.25、0.5，1、2、4小時(shí)，通過(guò)MTT法分析細(xì)胞增殖能力，利用堿性磷酸酶(ALP)的表達(dá)評(píng)價(jià)其分化性能；通過(guò)流式細(xì)胞儀、免疫熒光染色和RT-PCR測(cè)定細(xì)胞周期G1/S百分比、細(xì)胞周期依賴(lài)激酶2和

2、4(CDK2、CDK4)的活性改變及E2F1、p27、SIVA-1mRNA的表達(dá)證明FSS促成骨細(xì)胞由G1期向S期的轉(zhuǎn)化。 結(jié)果：短期內(nèi)(0.25h、0.5h) FSS促增殖作用明顯，并且細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)前移；但在1h、2h、4h卻有明顯抑制增殖作用。FSS同樣增加了ALP的活性，尤其在應(yīng)力作用0.25h、0.5h時(shí)顯著(比對(duì)照達(dá)128％和158％)；而應(yīng)力作用1h、2h、4h后減低了ALP的表達(dá)。在FSS作用1h內(nèi)細(xì)胞周期S期百分

3、比增高，作用0.5h后與對(duì)照組比較明顯增高(P<0.05)；但隨著時(shí)間的增加細(xì)胞周期S期百分比開(kāi)始下降，當(dāng)作用時(shí)間持續(xù)4h后S期百分比下降明顯(P<0.05)。流體應(yīng)力增加了活化pRb的CDK2、CDK4的活性，而且與CDK2相關(guān)的E2F1表達(dá)量也明顯增加；而細(xì)胞周期依賴(lài)激酶抑制劑p27和細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)因子SIVA-1在流體應(yīng)力作用下有所下降。其中流體切應(yīng)力在0.25h、0.5h明顯增加了E2F1mRNA的表達(dá)水平(P<0.05)，作用1