以VEGF和-或surivin為靶點(diǎn)的siRNA轉(zhuǎn)染對(duì)A549細(xì)胞的生物效應(yīng).pdf

1、目的：探討以VEGF和/或survivin為靶點(diǎn)的siRNA轉(zhuǎn)染及其對(duì)非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer, NSCLC)A549細(xì)胞的生物效應(yīng),探討雙靶點(diǎn)siRNA轉(zhuǎn)染是否增加效應(yīng)。
　　方法：培養(yǎng)NSCLC A549細(xì)胞,以脂質(zhì)體包裹VEGF和/或suvivin siRNA并轉(zhuǎn)染前者。實(shí)驗(yàn)共分5組:第1組轉(zhuǎn)染VEGF siRNA,第2組轉(zhuǎn)染survivin siRNA,第3組轉(zhuǎn)染VEGF siRN

2、A+survivin siRNA,第4組轉(zhuǎn)染negative control siRNA(nc),第5組僅轉(zhuǎn)染空白脂質(zhì)體,稱為blank control( bc);各組轉(zhuǎn)染的siRNA終濃度皆為50nmol/L。用RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)NSCLC A549細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前后VEGF mRNA和survivin mRNA的相對(duì)表達(dá)量;Western Blot檢測(cè)VEGF蛋白和survivin蛋白的表達(dá)變化;CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的變化;

3、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率的變化。
　　結(jié)果：1. RT-qPCR和Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示:與陰性、空白對(duì)照相比,轉(zhuǎn)染VEGF siRNA或VEGF siRNA+survivin siRNA48h后VEGF mRNA和VEGF蛋白的表達(dá)顯著下調(diào),且前組明顯低于后組;轉(zhuǎn)染 survivin siRNA或 VEGF siRNA+survivin siRNA48h后survivin mRNA和survivin蛋白的表達(dá)顯著下

4、調(diào),但兩組之間無明顯差別。2.CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力的變化,結(jié)果顯示:與陰性、空白對(duì)照相比,VEGF siRNA、survivin siRNA、VEGF siRNA+survivin siRNA轉(zhuǎn)染組在24h、48h、72h后細(xì)胞增殖能力顯著降低,且后二組效果最明顯,但此二組之間無明顯差別。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡能力的變化,結(jié)果顯示:與陰性、空白對(duì)照相比,轉(zhuǎn)染survivin siRNA或VEGF siRNA+survivi

5、n siRNA48h后細(xì)胞的凋亡率升高,且前組更明顯;而轉(zhuǎn)染VEGF siRNA48h后細(xì)胞的凋亡率無明顯升高。
　　結(jié)論：1.VEGF siRNA和 VEGF siRNA+survivin siRNA轉(zhuǎn)染均可顯著下調(diào)VEGF mRNA、VEGF蛋白的表達(dá)水平,但前組的作用更顯著;survivin siRNA和VEGF siRNA+survivin siRNA轉(zhuǎn)染均可顯著下調(diào)survivin mRNA、survivin蛋白的表達(dá)水

6、平,兩組的作用無差別。2.VEGF siRNA、survivin siRNA、VEGF siRNA+survivin siRNA轉(zhuǎn)染均可顯著抑制細(xì)胞的增殖能力,后二組的效果最明顯,但此二組之間無明顯差別。3.survivin siRNA或VEGF siRNA+survivin siRNA轉(zhuǎn)染可增加細(xì)胞的凋亡率,且前組更明顯,而VEGF siRNA轉(zhuǎn)染未增加細(xì)胞的凋亡率。4.比起單靶點(diǎn)抑制,盡管本研究采用的VEGF siRNA+survi