轉染A549細胞總RNA的樹突狀細胞疫苗抗腫瘤效應的體外研究.pdf

1、目的：1）明確從人重組的粒細胞集落刺激因子（human recombination granulocyte colony stimulating factor，rhG-CSF）動員的外周血干細胞采集物中分離誘導樹突狀細胞（dendritic cells，DCs）的可行性。2）探討利用脂質(zhì)體包裹人肺腺癌細胞株A549總RNA轉染DCs來制備疫苗的可行性及實驗條件的優(yōu)化。3）觀察DCs疫苗在體外誘導特異性抗腫瘤免疫反應的能力。
　　

2、 方法：2008年8月—2009年8月間本院外周血干細胞移植術供者按照常規(guī)方法皮下注射10 μg·kg-1·d-1，連續(xù)5天，在第5天動員達到高峰時采集外周血干細胞。收集15例采集物。利用密度梯度離心法從外周富集血中分離出單個核細胞，貼壁獲得單核細胞，并進一步誘導為DCs。同時利用提取的A549細胞總RNA轉染DCs來制備疫苗，并與T細胞混合培養(yǎng)，擴增細胞毒性T淋巴細胞（cytotoxic T lymphocytes，CTLs）；實驗分

3、為轉染A549細胞總RNA的DCs組、未轉染DCs組和轉染空脂質(zhì)體DCs組，分別以流式細胞術（FCM）鑒定DCs表型、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測IL-12、IFN-γ分泌水平、3H-TdR摻入檢測T細胞增殖能力及乳酸脫氫酶（LDH）釋放法測定殺傷腫瘤活性并比較各組差異。
　　 結果：1）轉染總RNA組DCs表面CD40、CD80、CD83、HLA-DR的表達較未轉染組DCs和轉染空脂質(zhì)體組DCs均有升高，CD40在三組的表

4、達率分別為：（69.01±7.67）％、（19.28±3.51）％和（39.62±2.72）％；CD80在三組的表達率分別為：（74.39±6.46）％、（15.48±3.03）％和（25.70±2.92）％；CD83在三組的表達率分別為：（81.79±4.61）％、（13.29±2.34）％和（31.42±1.97）％；HLA-DR在三組的表達率分別為：（76.53±5.13）％、（49.23±4.05）％和（29.94±3.53）％

5、，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；2）轉染總RNA組DCs的IL-12和IFN-γ分泌水平較未轉染組及轉染空脂質(zhì)體組明顯升高（P<0.05），三組IL-12分別為：（543.24±68.33）pg/ml、（77.11±27.65）pg/ml和（167.78±31.84）pg/ml；三組IFN-γ分別為：(122.95±32.84)pg/ml、(41.06±10.97)pg/ml和(56.08±15.96) pg/ml；3）3H-TdR

6、摻入試驗所得的cpm值，轉染A549總RNA的DCs組：7 437±720，未轉染DCs組：2 207±296，轉染空脂質(zhì)體的DCs組：2 443±314，陽性對照組為：16 739±91，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；4）LDH釋放法可見轉染A549總RNA的DCs組的特異性殺瘤活性（58.55±8.27）％，明顯高于未轉染組（36.03±4.00）％和轉染空脂質(zhì)體組（33.47±8.21）％，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。