體外研究化學(xué)發(fā)光法篩選人血清PON的激動(dòng)劑和抑制劑.pdf

1、對(duì)氧磷酶(PON)是一種定位在高密度脂蛋白(HDL)上的內(nèi)酯酶,可以保護(hù)低密度脂蛋白(LDL)過氧化,人體內(nèi) PON的活性水平涉及很多疾病的發(fā)病機(jī)制,因而研究藥物對(duì)PON的作用有重要的意義。吖啶酯類化合物9-(4-甲基苯基)氧羰基-10甲基吖啶酯三氟磺酸鹽(CPOCMA)已經(jīng)被證實(shí)是人血清對(duì)氧磷酶的特異性水解底物,具有良好的化學(xué)發(fā)光性能,因此本課題以CPOCMA為底物,體外研究化學(xué)發(fā)光法從不同金屬離子和中藥中篩選血清PON激動(dòng)劑和抑制劑

2、,為臨床用藥提供一定的指導(dǎo)意義。
　　本課題以已知的PON激動(dòng)劑Ca2+作為研究對(duì)象,首先將本課題創(chuàng)新的化學(xué)發(fā)光法和常規(guī)的以乙酰苯酚為底物的紫外分光光度法進(jìn)行方法學(xué)對(duì)照,顯示結(jié)果一致,證實(shí)了以CPOCMA為底物的化學(xué)發(fā)光法在測定血清PON活性應(yīng)用中的可行性。
　　為研究不同金屬離子對(duì)血清PON的影響,本課題從離子半徑、電荷及重金屬毒性等方面考慮,有規(guī)律的選擇了Li+, Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Al3+, F

3、e3+, Zn2+, Cu2+, Pb2+等10種金屬離子作為研究對(duì)象,在血藥濃度下測定各金屬離子對(duì)血清PON的作用,結(jié)果顯示:①Li+, Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Zn2+, Fe3+等金屬離子對(duì)血清PON具有激動(dòng)作用,且激動(dòng)作用大小依次為:Ca2+>Fe3+>Na+>K+>Li+>Zn2+>Mg2+;②Cu2+, Pb2+, Al3+等金屬離子對(duì)血清PON有抑制作用,且抑制作用大小依次為:Al3+>Pb2+>Cu2+

4、。
　　為進(jìn)一步研究金屬離子濃度變化對(duì)血清PON的影響,選取了一系列濃度范圍的上述金屬離子,測定其對(duì)血清PON作用的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn):①對(duì)于常見的Li+, Na+, K+, Ca2+, Mg2+等金屬離子(0.1-10.0mmol/L),不管濃度變化,均為PON激動(dòng)劑,在濃度大于6mmol/L時(shí),Mg2+的激動(dòng)作用大于Ca2+;②Fe3+(1.0-80.0μmol/L)隨濃度增大,對(duì)PON的激動(dòng)作用也增大,大于20μmol/L時(shí)激動(dòng)

5、作用有所減小,最大激動(dòng)作用介于二價(jià)和一價(jià)金屬離子之間;③ Zn2+(1.0-80.0μmol/L)在10-20μmol/L之間,對(duì)血清PON有激動(dòng)作用,其余濃度下對(duì)血清PON的作用不明顯;④對(duì)于一些微量金屬離子(1.0-80.0μmol/L): Cu2+, Pb2+, Al3+等,大于20μmol/L時(shí),Pb2+的抑制作用最大;⑤主族金屬離子在低濃度時(shí)(<6.0mmol/L)對(duì)血清 PON的激動(dòng)作用與離子電荷和半徑呈正相關(guān),濃度>6.0

6、mmol/L時(shí),對(duì)血清PON的激動(dòng)作用與離子電荷和濃度相關(guān),與半徑無關(guān)。
　　由于化學(xué)發(fā)光法能測定許多紫外分光光度法所不能測定的有較強(qiáng)紫外吸收干擾的藥物,本課題還運(yùn)用以CPOCMA為底物的化學(xué)發(fā)光法對(duì)丹參、虎杖、生姜和紅花四種中藥的粗提液對(duì)PON的活性影響進(jìn)行了測定,初步篩選出 PON激動(dòng)劑生姜和紅花;進(jìn)一步從紅花中分離并篩選出了PON激動(dòng)組分紅花水提液和揮發(fā)油,并試從紅花中分離羥基紅花黃色素 A和紅花紅色素,為化學(xué)發(fā)光法從紅花中