濱海白首烏影響黑素合成功效組分的篩選.pdf

1、濱海白首烏屬藦蘿科植物耳葉牛皮消(CynanchumauriculatumRoyleexWight)。白首烏是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥，具有烏須黑發(fā)、抗氧化、增強(qiáng)免疫功能等功效。本文通過(guò)對(duì)濱海白首烏主要成分C21甾苷進(jìn)行篩選，得到對(duì)黑素合成有影響作用的活性組分，該組分作為一種植物提取的天然活性物質(zhì)，具有更高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。并對(duì)其抑制、激活機(jī)理進(jìn)行探討，也為白首烏功能性產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 本文將白首烏的主要成分C21甾苷進(jìn)行柱層析分離，收

2、集洗脫部分。通過(guò)多巴速率氧化法初篩體系、豚鼠皮膚黑素合成模型，從體外化學(xué)反應(yīng)水平到體內(nèi)整體水平兩個(gè)層次，對(duì)白首烏中抑制、激活黑素合成的活性成分進(jìn)行篩選及藥效學(xué)研究。主要研究結(jié)果如下： 采用加熱回流提取法，對(duì)白首烏進(jìn)行乙醇提取，并通過(guò)化學(xué)萃取得到總甾苷。對(duì)總甾苷進(jìn)行定性、定量實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)的結(jié)果是總甾苷中C21甾苷的含量為85.22％。并通過(guò)多巴速率氧化法初篩體系，檢測(cè)總甾苷對(duì)酪氨酸酶活性的影響，發(fā)現(xiàn)其對(duì)酪氨酸酶有激活作用。對(duì)白首烏C

3、21甾苷進(jìn)行了硅膠柱層析分離，篩選出對(duì)酪氨酸酶活性有影響的組分C21甾苷(Ⅱ)、(Ⅲ)、(V)，其中C21甾苷(Ⅲ)對(duì)酪氨酸酶有抑制作用，而C21甾苷(Ⅱ)、(V)對(duì)酪氨酸酶有激活作用。 白首烏C21甾苷(Ⅲ)對(duì)酪氨酸酶抑制機(jī)理研究結(jié)果表明：C21甾苷(Ⅲ)對(duì)酪氨酸酶抑制作用顯著，可使酶促反應(yīng)進(jìn)程出現(xiàn)較長(zhǎng)遲滯期，穩(wěn)態(tài)酶活力緩慢下降。其終濃度0.08mg/mL時(shí)，遲滯時(shí)間為294s，穩(wěn)態(tài)酶活力下降67.79％。C21甾苷(Ⅲ)對(duì)酪

4、氨酸酶的抑制機(jī)理為競(jìng)爭(zhēng)性抑制。C21甾苷(Ⅱ)對(duì)酪氨酸酶的激活作用約是總甾苷的4.01倍；由C21甾苷(Ⅱ)對(duì)酪氨酸酶活性影響的特性曲線說(shuō)明，它對(duì)酪氨酸酶具有競(jìng)爭(zhēng)性和非競(jìng)爭(zhēng)性雙重性激活作用。 豚鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示：抑制黑素合成活性組分即C21甾苷(Ⅲ)作用后，黑素顆粒含量顯著低于對(duì)照組。這說(shuō)明C21甾苷(Ⅲ)不僅在體外直接抑制蘑菇酪氨酸酶活性而且還可在整體水平抑制豚鼠皮膚黑素合成；促進(jìn)黑素合成的活性組分即C21甾苷(Ⅱ)、C21甾