熱應(yīng)激對(duì)體外培養(yǎng)人黑素細(xì)胞生長(zhǎng)及黑素合成的影響.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩59頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  人類皮膚的顏色主要靠表皮中黑素細(xì)胞(MC)合成黑素以及黑素傳遞至周圍角質(zhì)形成細(xì)胞(KC)來維持。如果黑素細(xì)胞合成和傳遞黑素的功能出現(xiàn)異常,就會(huì)導(dǎo)致各種皮膚色素性疾?。ㄈ纾喊遵帮L(fēng)、黃褐斑等)的發(fā)生。因此研究影響黑素細(xì)胞合成和傳遞黑素的因素及其機(jī)制,對(duì)于預(yù)防和治療色素性皮膚病具有十分重要的臨床意義。
  皮膚暴露于日光下可引起皮膚曬黑,既往的研究認(rèn)為這些改變主要與紫外線(ultraviolet,UV),尤其是中波紫外

2、線(ultraviolet B,UVB)有關(guān)。但近來,越來越多的證據(jù)表明日光中主要的能量物質(zhì)—熱(紅外線)對(duì)皮膚具有類似UV的作用,同時(shí)熱(紅外線)還可增加皮膚細(xì)胞對(duì)UV的耐受性。上個(gè)世紀(jì)末,Nakazawa等首先比較了人表皮MC對(duì)兩種外源性刺激UVB和熱的細(xì)胞反應(yīng),結(jié)果發(fā)現(xiàn):熱(42℃,60min)和UVB(20mJ/cm2)輻射處理純化培養(yǎng)的人表皮MC3d后,MC樹突增多延長(zhǎng)、包體增大,細(xì)胞的酪氨酸酶活性和黑素合成增加、增值率下降。

3、同時(shí)還發(fā)現(xiàn)熱和UVB均能促進(jìn)KC-MC共培養(yǎng)體系和組織工程皮膚中有功能的活性MC數(shù)量增加,所以作者認(rèn)為熱與UVB具有類似的MC生理調(diào)節(jié)作用。但后來Kim等人報(bào)道了一個(gè)相反的結(jié)果,他們發(fā)現(xiàn)熱以溫度依賴方式分別減少了小鼠MC系Mel-Ab和人表皮MC的黑素合成。
  為了進(jìn)一步明確熱對(duì)黑素細(xì)胞生理功能的調(diào)節(jié)作用,本實(shí)驗(yàn)利用體外培養(yǎng)正常人表皮黑素細(xì)胞研究了熱應(yīng)激對(duì)黑素細(xì)胞的增殖活性、細(xì)胞形態(tài)、黑素合成及酪氨酸酶活性的影響,并初步從蛋白層

4、面上探討了熱休克蛋白72(HSP72)和p53在熱應(yīng)激引起黑素細(xì)胞功能變化中的作用。
  方法:
  1.無菌操作獲取正常人包皮環(huán)切術(shù)后的包皮,按照皮膚表皮細(xì)胞培養(yǎng)法獲取黑素細(xì)胞;利用堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)為主要有絲分裂原建立正常人表皮黑素細(xì)胞培養(yǎng)系,采用Masson-Fontana染色法對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定,確定細(xì)胞種系。
  2.采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法測(cè)定不同溫度(39℃、41℃、42℃、43

5、℃、45℃)的熱應(yīng)激對(duì)黑素細(xì)胞活力的影響并選擇最佳的溫度劑量作為實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
  3.比較正常溫度(37℃)與最佳實(shí)驗(yàn)溫度熱應(yīng)激下的黑素細(xì)胞形態(tài)、酪氨酸酶活性和黑素含量的變化;并利用Western-bloting和RT-PCR技術(shù)比較正常溫度和熱應(yīng)激條件下黑素細(xì)胞中HSP72和p53的蛋白和基因表達(dá)水平的變化。
  4.所獲得的數(shù)據(jù)結(jié)果經(jīng)SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。
  結(jié)果:
  1.黑素細(xì)胞在

6、熱應(yīng)激干預(yù)后細(xì)胞形態(tài)較干預(yù)前胞體增大,樹突明顯增多、變短呈多極化,樹突上明顯可見樹枝狀分叉,電子顯微鏡顯示:實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞胞漿中黑素小體數(shù)量較對(duì)照組有所增加,黑素小體中黑素更加致密。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)均較完整,未見明顯的細(xì)胞器破壞。
  2.體外培養(yǎng)的正常人黑素細(xì)胞(MC)在42℃每天干預(yù)1h,連續(xù)干預(yù)3d的熱應(yīng)激條件下,細(xì)胞的黑素合成量為0.152±0.005,較正常對(duì)照組(0.086±0.005)有明顯增加,增長(zhǎng)率為78

7、%(t=24.81,P<0.01);相同條件下實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的酪氨酸酶活性為0.193±0.004,較正常對(duì)照組(0.142±0.011)亦有明顯增加,增長(zhǎng)率為36.4%(t=9.34,P<0.01)。
  3.體外培養(yǎng)的正常人黑素細(xì)胞(MC)在42℃每天干預(yù)1h,連續(xù)干預(yù)3d的熱應(yīng)激條件下,細(xì)胞在末次干預(yù)后6h、12h和24h的HSP72和p53的蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組,末次干預(yù)后12小時(shí)的HSP72和p53的基因表達(dá)也均高于對(duì)照組。

8、
  結(jié)論:
  本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:42℃的熱應(yīng)激條件下,體外培養(yǎng)的正常人MC的細(xì)胞狀態(tài)明顯好于正常對(duì)照組,并且其細(xì)胞的各項(xiàng)生物學(xué)活性較正常對(duì)照組亦明顯增強(qiáng),這表明熱應(yīng)激對(duì)體外培養(yǎng)的正常人MC生物功能起著一定的正向調(diào)節(jié)作用。HSP72和p53蛋白在熱應(yīng)激狀態(tài)下表達(dá)較正常對(duì)照組升高,提示我們這兩種蛋白分子可能在熱應(yīng)激引起MC生物活性增強(qiáng)的過程中起著重要的調(diào)控作用。這為進(jìn)一步研究熱應(yīng)激調(diào)節(jié)人表皮MC生長(zhǎng)和黑素合成的作用機(jī)制提供了

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論