一種乙肝融合蛋白疫苗免疫效果探討.pdf

1、乙型肝炎病毒（HBV）是一種非致細(xì)胞病變的、有被膜的、雙鏈DNA病毒，是急慢性肝炎和肝細(xì)胞癌的主要致病因子?，F(xiàn)在全世界有超過20億的人被HBV感染過，其中有3.5億為慢性攜帶者，而中國就達(dá)1.2億。盡管導(dǎo)致HBV慢性感染的因素現(xiàn)在還不十分清楚，越來越多的證據(jù)表明，細(xì)胞介導(dǎo)的免疫（CMI）響應(yīng)，特別是抗原特異性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）在控制HBV感染的過程中發(fā)揮著十分重要的作用。故在乙肝疫苗研究中需要注意所使用的疫苗能否有效地激起機(jī)

2、體的CTL反應(yīng)，以何種途徑激起CTL反應(yīng)，是否能夠在體外有效地評(píng)價(jià)此種CTL反應(yīng)。經(jīng)過基因工程改造脫毒的炭疽桿菌致死因子片斷（LFn）是一種理想的抗原投遞工具，能夠安全有效地將與之融合的抗原帶入到抗原呈遞細(xì)胞（APC）的細(xì)胞質(zhì)中。已經(jīng)證明，與LFn融合的HIV抗原能通過MHCⅠ類和Ⅱ類途徑同時(shí)誘導(dǎo)出特異性的CD4+和CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫響應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)將HBV完整膜抗原以及涵蓋全長(zhǎng)的20個(gè)截短基因片段克隆至表達(dá)載體上，并表達(dá)純化這一系列

3、融合蛋白，進(jìn)行Balb/c小鼠以及中國恒和猴的免疫注射工作，使用IFN-γELISPOT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞免疫響應(yīng)水平，并評(píng)價(jià)HBV全長(zhǎng)膜蛋白的免疫原性以及用表達(dá)的小蛋白作為刺激物的可行性。
　　 主要組織抗原（Madior Histocompatibility Complex）MHC分子在所有細(xì)胞表面均有表達(dá)，并擔(dān)任抗原肽呈遞的重要功能，在免疫系統(tǒng)的特異性識(shí)別方面發(fā)揮重要作用。中國具有廣泛的免疫學(xué)動(dòng)物模型-中國恒河猴資源，其遺傳背景

4、尤其MHC-Ⅰ類分子的情況尚不太清楚。本實(shí)驗(yàn)使用SSP-PCR（Sequence-Specific Primer-PCR）的方法在約550只中國恒河猴中篩選可能具有呈遞HBV全長(zhǎng)膜蛋白表位的基因型Mamu-A*11的基因型，并將結(jié)果與印度恒河猴中此種基因型出現(xiàn)頻率進(jìn)行比較。
　　 本文主要工作集中在尋找HBV全長(zhǎng)膜蛋白中國恒河猴MHC-Ⅰ類分子限制性表位，并同時(shí)進(jìn)行中國恒河猴的MHC-Ⅰ類基因的分型工作，以期建立MHC基因與限制