Hedgehog信號通路及TGF-β激活性激酶1在胰腺癌發(fā)病及預(yù)后中的作用研究.pdf

1、胰腺癌(pancreatic cancer，PC)是消化系統(tǒng)較常見、惡性程度較高的腫瘤之一。胰腺癌發(fā)病隱匿，早期在臨床上缺乏特異表現(xiàn)，惡性程度高，極易出現(xiàn)早期局部侵犯和轉(zhuǎn)移，在確診時絕大多數(shù)的病人已存在局部或廣泛轉(zhuǎn)移，不能行手術(shù)切除，5年生存率＜6％。因此提高胰腺癌的早期診斷率，是實(shí)現(xiàn)早期治療、改善患者生存率和死亡率的關(guān)鍵。目前臨床上尚缺乏有效的非創(chuàng)傷性早期篩查手段，因此迫切需要研究和揭示胰腺癌的分子發(fā)病機(jī)制，為其早期診斷及優(yōu)化治療提供

2、新的分子靶點(diǎn)。
　　 Hedgehog(Hh)信號通路異常激活在胰腺癌中是普遍存在的，與其發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。研究報(bào)道，Hh通路成員Shh和Gli1蛋白在胰腺癌組織中呈低到中度表達(dá);Shh和Gli1蛋白的表達(dá)與一些臨床病理特征存在顯著的相關(guān)性。Hh信號通路負(fù)性調(diào)控因子Sufu蛋白在胰腺癌組織為陽性表達(dá)，而癌旁胰腺組織及正常胰腺組織中均未見表達(dá)。
　　 絲裂原活化蛋白激酶激酶激酶(MAPKKK)家族成員之一TGF-β激活性

3、激酶1(TAK1)是炎癥免疫、應(yīng)激反應(yīng)及腫瘤等過程中許多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)連鎖反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)控因子，近年來，文獻(xiàn)報(bào)道TAK1可通過多種形式誘導(dǎo)NF-KB的激活。而NF-KB的直接轉(zhuǎn)錄靶點(diǎn)之一便是Hh通路的配體Shh，NF-KB的激活與胰腺癌中Hh通路的活化有關(guān)。由此我們提出假設(shè)，在胰腺癌進(jìn)展過程中，TAK1也發(fā)揮著作用，而且可能與Hh通路之間可能存在相互協(xié)調(diào)。
　　 基于上述研究現(xiàn)狀，本實(shí)驗(yàn)通過檢測Hh信號通路主要成員(Shh、Gli1、S

4、ufu)和TAK1及其活化形式PTAK1在胰腺癌中的表達(dá)，分析兩條途徑與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，深入研究其在胰腺癌預(yù)后中的作用。本研究包括兩個部分內(nèi)容，分述如下。
　　 一、人胰腺癌組織中Hh信號通路主要成員(Shh、Gli1、Sufu)和TAK1及其活化形式PTAK1表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性研究
　　 目的:檢測在胰腺癌組織和相應(yīng)癌旁組織中Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1的表達(dá)情況，分析胰腺癌組織中5種

5、蛋白的表達(dá)與胰腺癌患者臨床病理特征的相關(guān)性。
　　 方法:收集2005年5月至2012年9月長海醫(yī)院手術(shù)切除的169例胰腺癌患者的胰腺癌組織和配對的35例癌旁組織，同時收集患者臨床資料。通過查閱病歷和電話隨訪獲得以下內(nèi)容:人口學(xué)特征、病史、手術(shù)記錄、病理報(bào)告結(jié)果等。所有病例均經(jīng)病理確診為胰腺導(dǎo)管腺癌。采用Envision（兩步法）免疫組織化學(xué)法檢測胰腺癌和癌旁組織中5種蛋白的表達(dá)。通過卡方檢驗(yàn)或Fisher精確概率法與多因素lo

6、gistic回歸分析法，明確5種蛋白的表達(dá)水平與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等臨床病理特征的關(guān)系。
　　 結(jié)果:Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1在胰腺導(dǎo)管腺癌組織中高表達(dá)者分別為105例(70％)、136例(84.5％)、46例(30.1％)、126例(80.3％)與130例(81.3％)。
　　 1、胰腺癌中Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1表達(dá)量的相關(guān)性
　　 胰腺癌組織中S

7、hh、Sufu表達(dá)量呈正相關(guān)(P＜0.05)。
　　 胰腺癌組織中Gli1表達(dá)量分別與Sufu、TAK1表達(dá)量呈正相關(guān)(P＜0.05)。
　　 胰腺癌組織中Sufu表達(dá)量分別與Shh、Gli1、TAK1表達(dá)量呈正相關(guān)(P＜0.05)。
　　 胰腺癌組織中TAK1表達(dá)量分別Gli1、Sufu、PTAK1表達(dá)量呈正相關(guān)(P＜0.05)。
　　 2、Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1表達(dá)與臨床病理

8、特征的關(guān)系
　　 腫瘤組織中Shh高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期明顯相關(guān)(P＜0.05)。
　　 腫瘤組織中Gli1高表達(dá)與腫瘤局部浸潤、分化程度顯著相關(guān)(P＜0.05)。
　　 腫瘤組織中Sufu高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P＜0.05)。
　　 腫瘤組織中TAK1高表達(dá)與腫瘤部位相關(guān)(P＜0.05)。
　　 (P)TAK1表達(dá)與上述特征無明顯相關(guān)性。
　　 3、Shh、Gli

9、1、Sufu、TAK1及PTAK1表達(dá)與TNM分期的關(guān)系
　　 單因素分析結(jié)果顯示，TNM分期分別與Shh表達(dá)、Gli1表達(dá)、Sufu表達(dá)、腫瘤部位、腫瘤分化程度潛在相關(guān)(P＜0.25)。
　　 單獨(dú)對Ⅰ期、Ⅱ期的病人進(jìn)行了分析，得出以下結(jié)果:
　　 單因素分析結(jié)果顯示，TNM分期分別與Shh表達(dá)、Gli1表達(dá)、Sufu表達(dá)、TAK1表達(dá)、PTAK1表達(dá)、腫瘤部位、年齡潛在相關(guān)(P＜0.25)。
　　 多

10、因素分析結(jié)果顯示，Shh高表達(dá)、胰頭部胰腺癌與高等級TNM分期顯著相關(guān)(P＜0.05)。
　　 4、Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系
　　 單因素分析結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分別與年齡、腫瘤部位、局部浸潤、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、Shh表達(dá)、Sufu表達(dá)、PTAK1表達(dá)潛在相關(guān)(P＜0.25)。
　　 5、胰腺癌組織5種蛋白的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織(P＜0.001)。
　　 多因素分

11、析結(jié)果顯示，Shh高表達(dá)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:胰腺癌組織中TAK1表達(dá)量分別與Gli1、Sufu表達(dá)呈正相關(guān)，提示兩條途徑可能存在相互作用。胰腺癌組織Shh高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期明顯相關(guān)，Gli1高表達(dá)與腫瘤局部浸潤、分化程度顯著相關(guān);Sufu高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān);Shh高表達(dá)是高等級TNM分期（單獨(dú)對Ⅰ期、Ⅱ期的病人進(jìn)行分析）及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立預(yù)測因子;(P)TA

12、K1表達(dá)與上述特征無明顯相關(guān)性;胰腺癌組織上述蛋白的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織，提示Hh信號通路在胰腺癌發(fā)生中發(fā)揮作用。
　　 二、人胰腺癌組織中Hh信號通路主要成員(Shh、Gli1、Sufu)和TAK1及其活化形式PTAK1表達(dá)與胰腺癌預(yù)后的相關(guān)性研究
　　 目的:分析胰腺癌組織中Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1表達(dá)水平與胰腺癌患者預(yù)后的相關(guān)性。
　　 方法:收集2005年5月至2012年9月長

13、海醫(yī)院行手術(shù)治療的169例胰腺癌患者的病例。所有患者術(shù)前均未行化療、放療。調(diào)查內(nèi)容包括人口學(xué)特征、個人生活習(xí)慣、病史、病理報(bào)告、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果、總生存期等。通過查閱病歷、電話隨訪獲得上述資料。生存期隨訪截止時間為2013年2月6日。采用Kaplan-Meier法及Cox回歸分析法，評價上述蛋白在癌組織中的表達(dá)水平及這些蛋白的組合對患者預(yù)后的影響。
　　 結(jié)果:本研究共隨訪胰腺導(dǎo)管腺癌患者169例，年齡中位數(shù)為61歲（年齡范圍26

14、-82歲），其中男性占60.9％。隨訪時間中位數(shù)為11個月（時間范圍2.03-53.77個月）。排除術(shù)后一個月內(nèi)死亡的病例后，共166例患者納入生存分析?；颊咧形豢偵鏁r間（95％可信區(qū)間）為11(9.45-12.01)個月。
　　 單因素分析結(jié)果顯示，患者總生存期分別與性別、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期、CA199、Gli1、Sufu、TAK1、PTAK1、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移潛在相關(guān)(P＜0.25)。Gli1、Sufu、TAK1、P

15、TAK1低表達(dá)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、高等級TNM分期、血CA199高均與患者總生存期下降顯著相關(guān)(P＜0.05)。多因素分析結(jié)果表明，PTAK1低表達(dá)、CA199＞1000 U/ml、腫瘤分化程度低均為總生存時間下降的獨(dú)立預(yù)測因子(P＜0.05)。
　　 對蛋白組合變量的生存分析顯示:Gli1high/Sufuhigh組較Gli1high/Sufulow組、Gli1high/TAK1high組較Gli1high/TAK1low組生存期長(

16、P＜0.05)。Gli1high/PTAK1high組較Gli1high/PTAK1low及PTAK1high/Gli1low組生存期長(P＜0.05)。Sufuhigh/TAK1high組較Sufuhigh/TAK1low及TAK1high/Sufulow組生存期長(P＜0.05)。
　　 單因素生存分析顯示:組合變量Gli1high/Sufuhigh、Gli1high/TAK1high、Gli1high/PTAK1high、

17、Sufuhigh/TAK1high、Sufuhigh/PTAK1high、Gli1high/Sufuhigh/TAK1high與生存期較長顯著相關(guān)(P＜0.05)。多因素生存分析發(fā)現(xiàn)Gli1high/PTAK1high、Gli1high/Sufuhigh/TAK1high是預(yù)后好的獨(dú)立預(yù)測因子(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:胰腺導(dǎo)管腺癌組織Gli1、Sufu、TAK1、PTAK1低表達(dá)與術(shù)后患者生存期下降顯著相關(guān);PTAK1低表

18、達(dá)為總生存時間下降的獨(dú)立預(yù)測因子，提示兩條途徑與胰腺癌預(yù)后相關(guān)。Gli1、Sufu與(P)TAK1高表達(dá)組合變量Gli1high/Sufuhigh、Gli1high/TAK1high、Gli1high/PTAK1high、Sufuhigh/TAK1high、 Sufuhigh/PTAK1high、Gli1high/Sufuhigh/TAK1high與預(yù)后較好明顯相關(guān):提示TAK1與Hh信號通路兩條途徑在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中可能存在相互影響，