p38MAPK信號通路在胰腺癌uPA表達及其在阿霉素誘導胰腺癌細胞侵襲、凋亡中的作用.pdf

1、第一部分 第一節(jié):uPA、uPAR在胰腺癌中的表達 目的:探討尿激酶型纖溶酶原激活劑(UrokinasePlasminogenActivator,uPA)、尿激酶型纖溶酶原激活劑受體(UrokinasePlasminogenActivatorrecepteruPAR)在胰腺癌中mRNA及蛋白水平的表達，及其表達同胰腺癌的臨床病理之間的關系，以探討UPA和UPAR在胰腺癌侵潤及轉移中的意義。 方法:用RT-PCR檢

2、測UPA和UPAR在85例胰腺癌組織中有轉移的癌組織及無轉移的癌組織mRNA表達水平，并對上述結果進行圖像分析以確定各組標本相對密度，t檢驗各組差異，以比較有轉移和無轉移的胰腺癌組織uPA和uPARmRNA水平的差異。利用組織芯片技術和免疫組織化學技術相接合在85例胰腺癌組織切片標本中檢測癌組織，癌旁組織，淋巴結中uPA和uPAR的蛋白表達水平，并同胰腺癌臨床病理之間做比較，以確定uPA和uPAR的蛋白表達與那些胰腺癌臨床病理有關。

3、 結果:uPAmRNA在胰腺炎中表達為0.236±0.067，在不伴有轉移的胰腺癌中表達為0.639±0.052，胰腺癌中伴有轉移者為1.064±0.082。uPARmRNA在胰腺炎中表達0.463±0.0374，在不伴有轉移的胰腺癌中表達為0.692±0.0451，胰腺癌中伴有轉移者為1.105±0.076。胰腺癌組織中uPA和uPAR的表達明顯高于胰腺炎組織的表達(p＜0.05)，有轉移的癌組織比無轉移的高(p＜0.05)。uP

4、A在85例胰腺癌組織中蛋白表達陽性率為69.41％，85例癌旁組織中表達陽性率為7.06％，75例淋巴結中表達陽性率為45.33％，69例有轉移的胰腺癌組織中表達陽性率為76.81％。uPAR在85例胰腺癌組織中蛋白表達陽性率為72.94％，85例癌旁組織中表達陽性率為4.71％，75例淋巴結中表達陽性率為49.33％，69例有轉移的胰腺癌組織中表達陽性率為81.16％。u-PA和u-PAR的表達與性別，年齡，腫瘤部位，腫瘤大小，腫瘤病

5、理類型，TNM分期無關，與有無淋巴結轉移和有無侵潤轉移有關(p＜0.05)。 結論:uPA和uPAR是反映胰腺腫瘤進展和生物學特性的指標，是臨床上判斷預后的良好指標之一。 第二節(jié):p38MAPK在胰腺癌中的表達 目的:探討絲裂原活性蛋白激酶(mitogen-activedproteinkinase，MAPK)的家族重要成員p38MAPK在胰腺癌中的蛋白表達，及分析p38MAPK表達同胰腺癌的臨床病理之間的關系，以

6、探討p38MAPK在胰腺癌的發(fā)生，發(fā)展中的作用。 方法:利用組織芯片技術同免疫組織化學技術相接合在85例胰腺癌組織切片標本中檢測癌組織，癌旁組織，淋巴結中p38MAPK蛋白表達水平，并同胰腺癌臨床病理之間做比較，以確定p38MAPK蛋白表達與那些胰腺癌臨床病理有關。 結果:p38MAPK陽性表達于胰腺癌細胞的細胞核內，少數位于胞漿內，p38MAPK在85例胰腺癌組織中蛋白表達陽性率為85.88％，85例癌旁組織中表達陽性

7、率為21.18％，但其染色明顯較癌組織為淡。在85例總的淋巴結中表達陽性率為42.35％，而在69例有轉移的淋巴結組織中表達陽性率為46.38％，在16例無轉移的淋巴結中陽性表達率為25％。p38MAPK的表達與性別，年齡，腫瘤部位，腫瘤大小，腫瘤病理類型，組織分化無關，在有淋巴轉移的癌組織中p38MAPK表達高于無淋巴轉移的癌組織(X2=4.237p=0.04)，在有侵潤轉移的癌組織中p38MAPK表達高于無侵潤轉移的癌組織(X2=6

8、.586p=0.01)。 結論:信號分子p38MAPK信號轉導分子通路的改變在胰腺癌的發(fā)展中起了一定作用，是反映胰腺腫瘤進展和生物學特性的指標，是臨床上判斷預后的指標之一。 第二部分:p38MAPK在胰腺癌BxPC-3細胞株中表達uPA作用的研究 目的:探討p38MAPK(p38mitogen-activedproteinkinase)信號通路在人胰腺癌細胞表達尿激酶型纖溶酶原激活劑(UrokinasePlasm

9、inogenActivator,uPA)中的作用，以及p38MAPK信號通路在人胰腺癌細胞體外侵襲中的作用。 方法:用Westernblotting和RT-PCR法分別檢測BxPC-3和Aspc-1胰腺癌細胞株中p38MAPK和uPA的表達，蛋白激酶活性實驗觀察BxPC-3細胞p38MAPK抑制劑SB203580對BxPC-3細胞內p38MAPK活性的影響，RT-PCR觀察p38MAPK抑制劑SB203580對BxPC-3細胞u

10、PA表達的影響，細胞侵襲實驗觀察p38MAPK抑制劑SB203580對BxPC-3胰腺癌細胞株的侵襲作用。 結果:uPAmRNA在BxPC-3、Aspc-1兩株細胞株中分別是0.162±0.008和1.090±0.014，兩比較差異顯著。Westernblotting檢測檢測兩種胰腺癌細胞p38MAPK和phosph-p38MAPK，BxPC-3細胞株和Aspc-1細胞株都有p38MAPK蛋白的表達，但Aspc-1細胞株表達較弱

11、。BxPC-3細胞株內源性p38MAPK蛋白高活性表達，而Aspc-1細胞株內源性p38MAPK蛋白活性的表達很低。Matrigel細胞侵襲力實驗，胰腺癌BxPC-3和Aspc-1細胞穿膜細胞的數目分別為353.33±12.78，155.66±9.72，差異有顯著性。細胞體外侵襲實驗結果表明，給予20umol/L、10umol/L、5umol/L、2umol/L、1umol/Lp38MAPK抑制劑SB203580后BxPC-3細胞的細胞

12、穿膜細胞的數目為267.33±9.71、272.00±17.35、324.33±20.60、340.33±16.04、338.33±10.97，對照組細胞穿膜細胞的數目為353.33±12.67，采用單因素方差分析F=18.186，組間比較10umol/L、20umol/LSB203580治療組同其他組差異顯著，侵襲顯著減少。10umol/LSB203580可抑制80％的Hsp27(MAPKAPK-2的一種底物)的磷酸化,20umol/

13、LSB203580可抑制90％的Hsp27的磷酸化。SB203580對p38MAPK和MAPKAPK-2的表達無影響。給予1umol/L、2umol/L、5umol/L、10umol/L、20umol/Lp38MAPK抑制劑SB203580，BxPC-3細胞株uPAmRNA的表達分別為1.079±0.002、1.075±0.013、0.996±0.129、0.872±0.075、0.839±0.134。采用單因素方差分析F=5.517，

14、10umol/L、20umol/Lp38MAPK抑制劑SB203580干預組同其他組相比，差異顯著。 結論:p38MAPK信號通路在胰腺癌BxPC-3細胞侵襲轉移中具有重要作用；p38MAPK信號轉導途徑可以誘導人胰腺癌BxPC-3細胞表達uPA。 第三部分:阿霉素誘導胰腺癌BxPC-3細胞侵襲、凋亡過程中p38MAPK表達的研究 目的:研究阿霉素誘導胰腺癌細胞凋亡過程中p38MAPK表達的變化，探討p38MA

15、PK在其中的作用，并探討阿霉素抑制胰腺癌細胞侵襲力的影響，及其發(fā)生機制。 方法:用AnnexinV-PI染色及流式細胞技術分析阿霉素及應用p38MAPK抑制劑SB203580對胰腺癌細胞凋亡的影響，同時利用免疫細胞化學法觀察經阿霉素及SB203580處理人胰腺癌BxPC-3細胞后，p38MAPK的表達水平；用Boyden小室檢測經阿霉素及SB203580處理后胰腺癌BxPC-3細胞的侵襲力。 結果:SB203580(20

16、umol/L)干預組胰腺癌BxPC-3細胞凋亡率為20.1±1.35％，阿霉素作用24h后誘導胰腺癌BxPC-3細胞凋亡，凋亡率為31.10±2.73％，加用SB203580抑制p38MAPK通路后可增強阿霉素誘導的凋亡作用，凋亡率達40.4±2.57％。采用單因素方差分析F=136.79，組間比較組與組之間差異顯著。以20umol/L阿霉素作用BxPC-3胰腺癌細胞24h后可見p38MAPK在細胞染色后呈現深褐色顆粒散在分布于部分或整

17、個細胞核及細胞漿內，聯合應用SB203580后可見p38MAPK表達顆粒密度減低，數量減少。Boyden小室實驗：細胞株內分別加入阿霉素(20umol/L)，SB203580(20umol/L)及合用阿霉素(20umol/L)與SB203580(20umol/L)與細胞共同孵育24h后細胞的細胞穿膜細胞的數目為267.33±9.71、285.25±9.71、255.67±14.05，對照組細胞穿膜細胞的數目為353.33±12.67，采