Wnt2信號通路在胰腺癌轉(zhuǎn)移及侵襲中的作用.pdf

1、目的：
　　觀察Wnt2蛋白在胰腺癌組織中的表達狀況及其對胰腺癌細胞增殖遷移侵襲等生物學(xué)行為的影響；初步探討Wnt2蛋白影響侵襲轉(zhuǎn)移的途徑；探討Wnt2蛋白在胰腺癌星形細胞對胰腺癌細胞影響過程中發(fā)揮的作用。
　　方法：
　　1.胰腺癌組織病理Wnt2蛋白免疫組化染色，分析Wnt2蛋白在胰腺癌腫瘤組織與癌旁組織中表達的差異；并結(jié)合臨床病理參數(shù)分析Wnt2與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系；對病例資料進行隨訪觀察，根據(jù)不同Wnt2蛋

2、白表達狀況作生存分析。
　　2.構(gòu)建Wnt2過表達質(zhì)粒和干擾RNA、應(yīng)用Wnt2重組蛋白，觀察不同Wnt2蛋白表達水平的胰腺癌細胞株的生物學(xué)行為。
　　3.利用熒光實時定量PCR技術(shù)和Western Blot方法檢測Wnt2重組蛋白培養(yǎng)及干擾與過表達Wnt2后胰腺癌細胞EMT關(guān)鍵基因的mRNA和蛋白水平的表達；
　　4.檢測Wnt2蛋白在胰腺癌星形細胞及其上清中的表達情況，檢測星形細胞培養(yǎng)上清對胰腺癌細胞功能的影響。<

3、br>　　結(jié)果：
　　1.通過對86例胰腺癌組織病理切片的Wnt2蛋白免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，55例（63.5％）病理切片中胰腺癌細胞 Wnt2蛋白表達陽性；77例（89.5%）間質(zhì)細胞Wnt2表達陽性；Logistic回歸分析顯示：胰腺癌間質(zhì)細胞Wnt2蛋白表達與生存時間及無病生存期（DFS）相關(guān)（P=0.002、P=0.007），生存分析顯示免疫組化間質(zhì)細胞染色評分大于10分的患者生存期與評分小于10分的患者相比有顯著性差異（P=0

4、.019）。
　　2.生物學(xué)行為觀察結(jié)果顯示：與對照組相比，胰腺癌細胞株過表達組、應(yīng)用 Wnt2重組蛋白組胰腺癌細胞增殖速度均加快（P<0.05）；而干擾組的細胞增殖速度受抑制（P<0.05）；應(yīng)用 Wnt2重組蛋白組胰腺癌細胞遷移（P<0.05）及侵襲能力增強（P<0.05）。
　　3.胰腺癌細胞EMT關(guān)鍵基因的mRNA的表達結(jié)果：RT-PCR結(jié)果顯示W(wǎng)nt2重組蛋白培養(yǎng) CFPAC-1和PANC-1細胞6小時后，Wnt2

5、重組蛋白培養(yǎng)組的Vimentin基因相對表達量分別是對照組的2.06倍（P<0.05）和1.96倍（P<0.05）；E-cadherin基因相對表達量分別是對照組的0.47倍（P>0.05）及0.33倍（P<0.05）；PANC-1細胞干擾及過表達組Vimentin、E-Cadherin基因相對表達量與對照組之間無顯著性差異。胰腺癌細胞EMT關(guān)鍵基因的蛋白表達水平：Western Blot結(jié)果顯示CFPAC-1和PANC-1細胞經(jīng)Wnt

6、2重組蛋白培養(yǎng)6小時后，Vimentin蛋白表達水平增加；E-cadherin只在Wnt2重組蛋白培養(yǎng)的CFPAC-1細胞中表達水平降低。PANC-1細胞干擾 Wnt2組，Vimentin蛋白表達水平較對照組降低，E-cadherin蛋白表達水平升高；PANC-1細胞過表達 Wnt2組，E-Cadherin、Vimentin蛋白表達水平均降低。4.激活的星形細胞及其培養(yǎng)液中可見Wnt2蛋白，星形細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)胰腺癌細胞增殖速度加快（P<

7、0.05）；細胞遷移（P<0.05）及侵襲能力增強（P<0.05）；細胞核內(nèi)β-catenin增多。
　　結(jié)論：
　　1. Wnt2蛋白在胰腺癌間質(zhì)細胞表達陽性與預(yù)后相關(guān)；患者間質(zhì)染色評分越高，生存期越短。
　　2. PANC-1和CFPAC-1胰腺癌細胞株過表達Wnt2、Wnt2重組蛋白培養(yǎng)均能使細胞增殖能力增加；反之，降低 Wnt2的表達則會抑制細胞增殖；Wnt2重組蛋白培養(yǎng)可增強胰腺癌細胞遷移和侵襲能力；但干擾及