MicroRNA-141-MAP4K4信號(hào)通路在胰腺癌中的作用研究.pdf

1、背景和目的：
　　胰腺癌目前仍然是人類癌癥中最棘手的難題,傳統(tǒng)的診斷和治療方法對(duì)胰腺癌幾乎沒有特別好的效果。因此我們迫切的需要弄清胰腺癌的發(fā)病機(jī)理,并尋找新的診斷方法和有效的治療手段。
　　MicroRNAs已經(jīng)被證明與多種腫瘤有關(guān),并能通過調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)參與腫瘤的發(fā)生,包括胰腺癌的發(fā)生過程。MiR-141屬于miR-200家族,主要參與上皮間葉轉(zhuǎn)化(EMT)的過程。最新研究表明,miR-141對(duì)腫瘤發(fā)生也起著至關(guān)重要的

2、作用。然而,miR-141在胰腺癌中的作用尚不明確。因此,本研究主要探討miR-141在胰腺癌中的作用,并且進(jìn)一步研究其可能的調(diào)控機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　選取2009年至2012年我院的40例胰腺腺癌組織標(biāo)本以及與之對(duì)應(yīng)的鄰近正常胰腺組織。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)組織中miR-141和MAP4K4的相對(duì)表達(dá)情況,用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)miR-141和MAP4K4之間的關(guān)系進(jìn)行系統(tǒng)分析。利用雙熒光素酶報(bào)告基因方法檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞系

3、中miR-141對(duì)MAP4K4是否有直接作用。
　　運(yùn)用脂質(zhì)體2000作為媒介將miR-141類似物、MAP4K4siRNA以及其他化學(xué)合成片段轉(zhuǎn)染至PANC-1和MiaPaCa-2細(xì)胞中。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和westernblot檢測(cè)轉(zhuǎn)染的效率。Westernblot也同時(shí)用來檢測(cè)MAP4K4,MMPs,Bax,Bcl-2,cyclinD1等蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)情況。通過MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖。流式細(xì)胞術(shù)用于檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的

4、改變。細(xì)胞的侵襲能力變化由Transwell實(shí)驗(yàn)來評(píng)估。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　MiR-141在胰腺癌組織中的表達(dá)顯著低于鄰近正常胰腺組織(P<0.01)。此外,和正常胰腺組織相比,miR-141在五株人胰腺癌細(xì)胞系中(AsPC-1,BxPC-3,PANC-1,MiaPaCa-2andSW1990)的表達(dá)水平均明顯下降(P<0.01)。然而,MAP4K4在胰腺癌組織中的表達(dá)明顯高于鄰近正常胰腺組織。Pearson相關(guān)分析表明,

5、胰腺癌組織中miR-141與MAP4K4的表達(dá)存在明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。
　　在胰腺癌細(xì)胞PANC-1和MiaPaCa-2中,過表達(dá)miR-141可以抑制細(xì)胞的增殖能力、單克隆形成能力及侵襲能力,導(dǎo)致細(xì)胞周期G1期阻滯,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。沉默MAP4K4對(duì)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響與過表達(dá)miR-141有著類似的效果。
　　雙熒光素酶報(bào)告基因分析表明轉(zhuǎn)染miR-141類似物后,攜帶有野生型MAP4K43’UTR的質(zhì)粒其熒光

6、素酶活性顯著得到抑制(P<0.01),而攜帶有突變型MAP4K43’UTR的質(zhì)粒的熒光素酶活性則沒有觀察到上述的顯著抑制效應(yīng)(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　在胰腺癌組織中,miR-141處于異常低表達(dá)狀態(tài)而MAP4K4處于異常高表達(dá)狀態(tài),且兩者之間存在明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系。MiR-141通過直接作用于MAP4K4而抑制胰腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖。因此,我們的研究表明miR-141可能作為胰腺癌的一類抑制物并有望成為胰腺癌治療的新靶