丙酮酸乙酯對(duì)膿毒癥凝血功能紊亂的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的
　　 1.應(yīng)用膿毒癥經(jīng)典盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(cecal ligation puncture，CLP)觀察丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate EP)對(duì)膿毒癥凝血功能紊亂的保護(hù)作用。
　　 2.動(dòng)態(tài)觀察CLP模型小鼠血液中高遷移率族蛋白B1(high mobility group boxlportein，HMGB1)的含量變化及肺組織蛋白表達(dá)水平，探討丙酮酸乙酯對(duì)膿毒癥凝血功能紊亂的作用機(jī)制，為膿毒癥器官功能保護(hù)提供

2、新的理論依據(jù)。
　　 方法
　　 將SPF級(jí)昆明（KM）雄性小鼠135只隨機(jī)分為假手術(shù)組（sham組）、手術(shù)組(CLP組)、治療組(EP組)，每組45只，觀察小鼠術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)活動(dòng)、進(jìn)食、呼吸，豎毛、腹瀉、分泌物、眼球凹陷、尿量等生存情況，采用夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)術(shù)后即刻、4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)共7個(gè)時(shí)間點(diǎn)的外周血血小板(PLT)計(jì)數(shù)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、肌酐(Cr)、

3、凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血酶時(shí)間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)、D-二聚體、蛋白C(PC)、高遷移率族蛋白B1(HMGB1)等指標(biāo)，并在活殺前行膿毒癥評(píng)分，觀察膿毒癥小鼠嚴(yán)重程度評(píng)分、生存時(shí)間，采用Western blot法檢測(cè)肺組織中HMGB1蛋白的表達(dá)水平，并進(jìn)行肺組織病理切片HE后觀察。
　　 結(jié)果
　　 1.觀察術(shù)后72h小鼠sham組存活率均為100％，EP組存活率為60％，CLP組存活率為10％(

4、P＜0.05)。與sham組相比，EP組和CLP組小鼠在8小時(shí)后PLT逐漸下降，但EP組顯著高于同時(shí)間點(diǎn)CLP組(P＜0.05);與sham組相比APTT、PT延長，但EP組較CLP組明顯延長時(shí)間較短(P＜0.05);與sham組相比ALT、Cr明顯升高，但EP組顯著低于同時(shí)間點(diǎn)CLP組(P＜0.05)。光鏡下CLP組、EP組肺組織可見明顯急性肺損傷表現(xiàn):充血、水腫、炎癥細(xì)胞浸潤、不同程度的微血栓形成，EP組較CLP組病理損傷明顯減輕，

5、且肺損傷病理評(píng)分明顯降低(P＜0.05）。
　　 2.EP組和CLP組觀察8小時(shí)后FIB明顯下降，到24小時(shí)達(dá)到峰值，但EP組顯著高于同時(shí)間點(diǎn)CLP組(P＜0.05)。EP組和CLP組觀察8小時(shí)后D-Dimer明顯升高，到12小時(shí)達(dá)到峰值，隨后逐漸降低，但EP組顯著低于同時(shí)間點(diǎn)CLP組（P＜0.05）。CLP組術(shù)后12小時(shí)血清PC開始明顯升高，48小時(shí)達(dá)到峰值并持續(xù)至72小時(shí)，而EP組在12小時(shí)PC明顯升高，且顯著高于同時(shí)間點(diǎn)C

6、LP組(P＜0.05)。CLP組在血清中發(fā)現(xiàn)HMGB1在觀察8小時(shí)后顯著升高，12小時(shí)出現(xiàn)峰值，隨后開始降低，效應(yīng)可持續(xù)超過72小時(shí)，但EP組顯著低于同時(shí)間點(diǎn)CLP組(P＜0.05)。sham組不同時(shí)間點(diǎn)小鼠HMGB1蛋白均有微量表達(dá)，而CLP組、EP組HMGB1蛋白從8小時(shí)開始表達(dá)明顯增多，以12～24小時(shí)為顯著，48小時(shí)開始下降但仍高于sham組，EP組同時(shí)間點(diǎn)蛋白水平顯著低于CLP組(P＜0.05），但仍比sham組高且有顯著性差