重組抗原pGEX-BSjGCP-BSj23診斷家畜日本血吸蟲(chóng)病研究.pdf

1、日本血吸蟲(chóng)病流行于我國(guó)南方十二省（直轄市、自治區(qū)），給人類(lèi)和動(dòng)物的健康造成嚴(yán)重威脅。準(zhǔn)確的診斷是做好血防工作的前提；而現(xiàn)有的日本血吸蟲(chóng)病診斷方法不能滿(mǎn)足診斷需要，因此尋求一種更為敏感、特異，并且具有療效考核價(jià)值的診斷方法是當(dāng)前的迫切需要。
　　 本文摸索確定了重組表達(dá)菌pGEX-BSjGCP-BSj23/BL21和pGEX-LHD-Sj23/BL21的最佳表達(dá)條件；比較了尿素變性-透析復(fù)性法與Protein Refolding

2、Kit兩種包涵體蛋白純化方法，優(yōu)化了重組抗原pGEX-BSjGCP-BSj23包涵體蛋白的純化技術(shù)；通過(guò)方陣試驗(yàn)，優(yōu)化了ELISA實(shí)驗(yàn)條件；以重組抗原pGEX-BSjGCP-BSj23（BSjGCP為日本血吸蟲(chóng)抱雌溝蛋白相關(guān)表位，Bsj23為日本血吸蟲(chóng)23kD表膜蛋白相關(guān)表位）和pGEX-LHD-Sj23（日本血吸蟲(chóng)23kD表膜蛋白的大親水區(qū)片段）以及日本血吸蟲(chóng)可溶性蟲(chóng)卵抗原SjSEA作為診斷抗原，分別檢測(cè)了70份健康水牛血清和104份

3、感染日本血吸蟲(chóng)病水牛血清，比較三種抗原獲得的敏感性和特異性；應(yīng)用pGEX-BSjGCP-BSj23-ELISA法檢測(cè)不同感染強(qiáng)度水牛血清，評(píng)價(jià)該重組抗原的診斷價(jià)值；以重組抗原pGEx-BSjGCP-BSj23和pGEX-LHD-Sj23以及可溶性蟲(chóng)卵抗原SjSEA作為診斷抗原，平行檢測(cè)了實(shí)驗(yàn)兔感染日本血吸蟲(chóng)前，感染日本血吸蟲(chóng)后2周、4周、6周以及用血吸蟲(chóng)病治療藥物吡喹酮治療后每月兔血清中三種抗原特異性抗體水平，分析兔血清中三種特異性抗體

4、的消長(zhǎng)變化，評(píng)價(jià)三種檢測(cè)方法的療效考核價(jià)值。
　　 結(jié)果表明，以重組抗原pGEX-BSjGCP-BSj23和可溶性蟲(chóng)卵抗原SjSEA作為診斷抗原，檢測(cè)水牛血吸蟲(chóng)病，兩者獲得的敏感性相當(dāng)，但前者獲得的特異性略高于后者，兩者獲得的診斷效果均優(yōu)于重組抗原pGEx-LHD-Sj23；重組抗原pGEX-BSjGCP-BSj23對(duì)于低感染強(qiáng)度水牛血清也具有一定的診斷效果；實(shí)驗(yàn)兔血清中抗重組抗原pGEX-BsjGCP-BSj23特異性抗體在感