蚓激酶基因在畢赤酵母中的表達(dá).pdf

1、蚓激酶(Lumbrokinase，LK)是從蚯蚓體內(nèi)提取的一種具有纖溶活性的蛋白水解酶，它能直接降解血中纖維蛋白原及激活纖溶酶原為纖溶酶。蚓激酶能降低血液粘稠度、溶栓、減少血小板聚集、改善微循環(huán)，具有良好的體內(nèi)外溶栓抗凝作用。作為溶栓藥物，蚓激酶先后在韓國(guó)和中國(guó)上市，在心腦血管疾病治療中顯示出明顯的療效。 畢赤酵母是目前應(yīng)用最為廣泛和成功的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)，其培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單易行、容易形成大規(guī)模生產(chǎn)；表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)過二硫鍵形成、正確折疊

2、、糖基化及信號(hào)處理等修飾，使其特性接近天然產(chǎn)物。鑒于上述原因，畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)成為開發(fā)蛋白類基因工程藥物的首選。 本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖谦@得能夠表達(dá)蚓激酶的基因工程酵母菌株。通過PCR擴(kuò)增目的基因，將其連接到畢赤酵母分泌型表達(dá)載體pPIC9K，得到目的基因表達(dá)載體。載體經(jīng)線性化后，電擊轉(zhuǎn)入畢赤酵母GS115中，經(jīng)過組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷平板篩選及G418篩選，得到一系列轉(zhuǎn)化子。經(jīng)PCR驗(yàn)證，目的基因已經(jīng)轉(zhuǎn)入酵母體內(nèi)。Northern dot bl