長(zhǎng)春新堿周期聯(lián)合小劑量環(huán)磷酰胺對(duì)SLE患者B淋巴細(xì)胞亞型及BAFF的影響.pdf

1、【背景】
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SystemicLupusErythmatosus,SLE）是由多種自身抗體及免疫復(fù)合物引起的累及多系統(tǒng)、多器官的自身免疫性疾病。迄今為止，仍缺乏特異的治療手段，糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑仍然是其主要的治療藥物。由于疾病的異質(zhì)性、病情活動(dòng)性評(píng)估的多樣性以及傳統(tǒng)治療方案副作用大不能耐受的現(xiàn)狀，使得我們迫切的需要探索SLE治療新的理念。我科借鑒聯(lián)合化療藥物治療淋巴瘤的成功經(jīng)驗(yàn)，依據(jù)細(xì)胞增殖動(dòng)力學(xué)原理選用周期特

2、異性藥物——長(zhǎng)春新堿(Vincristine,VCR)聯(lián)合周期非特異性藥物——環(huán)磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）治療SLE，經(jīng)過十多年的臨床及實(shí)驗(yàn)室證實(shí)，該方案治療SLE具有較好的療效和較少的副作用，但其具體的作用機(jī)制仍不明確。
　　盡管SLE病因仍不明確，但有大量的研究均證實(shí)，在SLE患者的腎臟和皮膚組織中可見大量活化T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，且SLE患者中存在自身反應(yīng)性B細(xì)胞過度活化以及大量自身抗體的產(chǎn)生。這充分表明，

3、T、B淋巴細(xì)胞在SLE的發(fā)病中起著重要的作用。有足夠證據(jù)顯示SLE患者中T、B淋巴細(xì)胞數(shù)量及功能均發(fā)生變化，但目前尚未形成一致看法?？赡苁怯捎赥、B淋巴細(xì)胞是一群較為復(fù)雜的細(xì)胞，可以分化為許多亞型，并且在疾病中所起的作用也不同，尤其，B淋巴細(xì)胞的異常增殖和活化在SLE的發(fā)病中起著舉足輕重的作用。所以我們推測(cè)認(rèn)為，在SLE的不同活動(dòng)期，B淋巴細(xì)胞可以分化為不同的亞型，導(dǎo)致疾病的發(fā)生、發(fā)展。而通過調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞的增殖及分化功能可能是VCR周

4、期聯(lián)合小劑量CTX治療SLE的主要機(jī)制之一，為此我們?cè)O(shè)立了該項(xiàng)研究。
　　【目的】
　?。?）明確T、B淋巴細(xì)胞亞型在SLE發(fā)病中的作用及其意義；
　?。?）探討VCR周期聯(lián)合小劑量CTX治療SLE對(duì)T、B淋巴細(xì)胞亞型的影響；
　?。?）進(jìn)一步明確通過調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞的分化和增殖功能是否是VCR周期聯(lián)合小劑量CTX治療SLE的重要機(jī)制之一。
　　【方法】
　　選取2011年6月至2013年1月在山西醫(yī)科

5、大學(xué)第二醫(yī)院風(fēng)濕科就診SLE患者28例，診斷均符合1997年修訂的美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（AmericanCollegeofRheumatology,ACR）分類標(biāo)準(zhǔn)。簽署知情同意書。收集SLE患者一般情況和臨床資料，根據(jù)SLE疾病活動(dòng)指數(shù)（systemiclupuserythematosusdiseaseactivityindex,SLEDAI）積分評(píng)估疾病的活動(dòng)性。同時(shí)選取正常對(duì)照組14名，均不符合SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)；非妊娠及哺乳期婦女；無(wú)其他

6、重大疾病史；未長(zhǎng)期應(yīng)用激素或免疫抑制劑；無(wú)其它自身免疫性疾病。試驗(yàn)在獲得研究對(duì)象知情同意后，抽取血樣標(biāo)本。
　　采用流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry,FCM）檢測(cè)入選的SLE患者及健康對(duì)照者外周血CD4+T、CD8+T、CD19+B、CD27+B、CD138+B淋巴細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA）方法檢測(cè)試驗(yàn)者血清BAFF水平。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚

7、合酶鏈反應(yīng)（Real-timeQuantitativePolymeaseChainReaction,RT-PCR）方法檢測(cè)試驗(yàn)者外周血BAFFmRNA的表達(dá)水平。
　　采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。
　　【結(jié)果】
　　1.SLE活動(dòng)期患者基線水平T、B淋巴細(xì)胞及其亞型比例的變化
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+T淋巴細(xì)胞比例顯示SLE活動(dòng)期患者與正常人分別為（33.74±7.56）％和（40.93±6.12）

8、%，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD8+T淋巴細(xì)胞比例顯示SLE活動(dòng)期患者與正常人分別為（31.95±8.01）%和（27.79±6.59）%，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　（3）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD19+B淋巴細(xì)胞比例顯示SLE活動(dòng)期患者與正常人分別為（20.18±5.09）%和（12.21±3.83）%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.011)。CD19+B淋巴細(xì)

9、胞比例與SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)（P=0.019）。
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD27+B淋巴細(xì)胞比例顯示SLE活動(dòng)期患者與正常人分別為（40.31±18.94）%和（31.54±4.46）%，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　（5）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD138+B淋巴細(xì)胞比例顯示SLE活動(dòng)期患者與正常人分別為（2.24±1.15）%和（1.00±0.76）%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.022)。CD138

10、+B淋巴細(xì)胞比例與SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)（P=0.001）。
　　2.VCR聯(lián)合小劑量CTX治療后對(duì)T、B淋巴細(xì)胞亞型的影響
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+T淋巴細(xì)胞比例顯示SLE活動(dòng)期患者與緩解期患者分別為（33.74±7.56）%和（33.00±11.02）%，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD8+T淋巴細(xì)胞比例顯示SLE活動(dòng)期患者與緩解期患者分別為（31.95±8.01）

11、%和（39.55±11.54）%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.018)。
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD19+B淋巴細(xì)胞比例顯示SLE活動(dòng)期患者與緩解期患者分別為（20.18±5.09）%和（11.95±6.88）%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.007)。
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD27+B淋巴細(xì)胞比例顯示SLE活動(dòng)期患者與緩解期患者分別為（40.31±18.94）%和（35.23±17.24）%，兩組比較差異無(wú)

12、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD138+B淋巴細(xì)胞比例顯示SLE活動(dòng)期患者與緩解期患者分別為（2.24±1.15）%和（0.81±0.72）%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)。
　　3.VCR周期聯(lián)合小劑量CTX治療前后與健康對(duì)照組的血清BAFF以及PBMCBAFFmRNA表達(dá)水平比較
　　SLE活動(dòng)期患者血清BAFF水平、PBMCBAFFmRNA表達(dá)水平與正常對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)

13、學(xué)意義（P＜0.05），SLE活動(dòng)期患者血清BAFF水平、PBMCBAFFmRNA表達(dá)水平與SLE緩解期患者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），SLE緩解期患者血清BAFF水平與健康對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　【結(jié)論】
　　1.SLE活動(dòng)期患者T、B淋巴細(xì)胞及其亞型比例發(fā)生明顯變化，且B淋巴細(xì)胞亞型變化與疾病活動(dòng)性相關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)T、B淋巴細(xì)胞數(shù)量及比例，可以評(píng)估SLE患者病情的活動(dòng)性并指導(dǎo)治療。