5氮雜胞苷對(duì)化療藥長(zhǎng)春新堿及環(huán)磷酰氨誘導(dǎo)NB細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：神經(jīng)母細(xì)胞瘤(NB)是兒童常見的顱外實(shí)體腫瘤之一。年齡超過一歲，伴有N—myc基因擴(kuò)增的NB患兒預(yù)后不佳。目前的治療方法包括外科手術(shù)，化療，干細(xì)胞移植等療效均不十分理想。其中NB細(xì)胞對(duì)化療藥耐藥便是其中一個(gè)比較突出的問題，因此，如何能夠逆轉(zhuǎn)NB細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥便成為一個(gè)熱點(diǎn)問題。 天冬氨酸特異的半胱氨酸蛋白酶(caspase)是一組與細(xì)胞因子成熟和細(xì)胞凋亡有關(guān)的酶，共14種。caspase-8是其中一員，具有強(qiáng)大的凋亡

2、激發(fā)和傳導(dǎo)功能。是NB細(xì)胞凋亡通路的重要一環(huán)。根據(jù)國(guó)外的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，預(yù)后較好，對(duì)化療藥敏感的NB細(xì)胞都有caspase-8蛋白的表達(dá)，相反預(yù)后差，對(duì)化療藥耐藥的NB細(xì)胞則無caspase-8表達(dá)。另有文獻(xiàn)報(bào)道，NB細(xì)胞中caspase-8沉默的主要原因是其基因的超甲基化。 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用細(xì)胞免疫組化染色及MTT細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)的方法來檢測(cè)去甲基藥5AZA是否可以通過逆轉(zhuǎn)caspase-8基因的超甲基化來使NB細(xì)胞重新表達(dá)caspase-

3、8蛋白，以及表達(dá)了caspase-8的NB細(xì)胞是否能夠恢復(fù)對(duì)傳統(tǒng)化療藥長(zhǎng)春新堿和環(huán)磷酰氨的敏感性。 方法: (1)細(xì)胞免疫組化染色方法檢測(cè)5AZA是否可以使NB細(xì)胞重新表達(dá)caspase-8蛋白。 (2)實(shí)驗(yàn)以5AZA培養(yǎng)的細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組，未用藥物處理的為對(duì)照組，用zlETD—FMK處理的細(xì)胞為抑制劑組，通過MTT細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)測(cè)量細(xì)胞經(jīng)過化療藥作用后的存活率來檢測(cè)經(jīng)5AZA作用而重新表達(dá)caspase-8蛋白的NB細(xì)

4、胞是否恢復(fù)對(duì)傳統(tǒng)化療藥物的敏感性。 結(jié)果: 通過免疫組化染色的實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)果是去甲基藥5AZA可以通過逆轉(zhuǎn)caspase-8基因的超甲基化來使NB細(xì)胞重新表達(dá)caspase-8蛋白，而MTT細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明5AZA可以通過使SY5Y細(xì)胞重新表達(dá)Caspase-8蛋白而重新恢復(fù)對(duì)化療藥長(zhǎng)春新堿及環(huán)磷酰胺的敏感性。 結(jié)論: 去甲基藥5AZA可以使NB細(xì)胞的caspase-8恢復(fù)表達(dá)，而恢復(fù)表達(dá)caspase