宮頸磷癌中p16基因擴增或缺失及eIF4E基因的表達.pdf

1、[目的]
　　 檢測p16的3個外顯子在宮頸鱗癌中擴增與丟失情況。并檢測相應(yīng)宮頸組織標(biāo)本中p16在宮頸鱗癌中的蛋白表達情況。探討p16在宮頸鱗癌中異常表達的可能機制。檢測eIF4E在正常宮頸上皮、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變(CIN)、宮頸鱗癌(SCC)中的表達,探討eIF4E在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中的意義和作用。
　　 [方法]
　　 對32例宮頸鱗狀細胞癌石蠟標(biāo)本進行切片和脫蠟,均用蘇木素輕染色,在顯微鏡下找準(zhǔn)正常組織(間

2、質(zhì))和癌組織的部位,進行顯微切割,分別取癌旁正常細胞和癌細胞,用商用試劑盒提取DNA。以p16的3個外顯子的基因序列為模板設(shè)計引物,在反應(yīng)體系中加入內(nèi)參照GAPDH和目的引物進行雙重PCR擴增檢測。運用Imago J軟件對宮頸癌組織和癌旁間質(zhì)組織PCR擴增產(chǎn)物的電泳條帶進行灰度分析,以二者的相對光密度值之比≥1.5倍為擴增、≤0.5倍為缺失的評判標(biāo)準(zhǔn)檢測32例標(biāo)本中p16的3個外顯子擴增或丟失。應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測32例宮頸鱗狀細

3、胞癌標(biāo)本中p16的表達情況。按細胞著色情況將宮頸鱗狀細胞癌中陽性病例分為低表達組和高表達組,然后分析p16低表達組和高表達組中,p16各外顯子中擴增或丟失的情況。應(yīng)用免疫組化SP法檢測79例宮頸病變中e IF4E的表達情況,其中包括10例慢性宮頸炎,22例CINⅠ級,24例CINⅡ/CINⅢ,23例宮頸鱗狀細胞癌。
　　 [結(jié)果]
　　 在32例宮頸鱗癌病變組織中,p16基因的第1、2、3外顯子擴增率分別為28.1％(9

4、732)、15.6%(5/32)、28.1%(9/32)。P16基因的第1、2、3外顯子缺失率分別為34.4%(11/32)、21.8%(7/32)、15.6%(5/32)。具有一個以上外顯子發(fā)生擴增或缺失改變?yōu)?1.3%(26/32)。免疫組化結(jié)果顯示:32例宮頸鱗癌病變組織中,p16陽性表達率為100%(32/32),其中高表達組65.6%(21/32),低表達組34.4%(11/32)。低表達組中,p16各外顯子表現(xiàn)為擴增的分別為

5、:27.3%(3/11)、9%q(1/11)、18.2%(2/11);高表達組中,p16各外顯子表現(xiàn)為擴增的分別為:28.6%(6/21)、19%(4/21)、33.3%(7/21),p16各外顯子發(fā)生擴增在高表達組和低表達組之間比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(Fisher確切概率法,p＞0.05)。低表達組中,p16各外顯子表現(xiàn)為缺失的分別為:27.3%(3/11)、9%(1/11)、18.2%(2/11);高表達組中,p16各外顯子表現(xiàn)為缺

6、失的分別為:38.1%(8/21)、28.6%(6/21)、14.3%(3/21)。16各外顯子發(fā)生缺失在低表達組和高表達組之間比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(Fisher確切概率法,p＞0.05)。免疫組化結(jié)果:按上述病例標(biāo)本順序(依次是宮頸炎、C1NⅠ、CINⅡ/Ⅲ、浸潤癌),石蠟標(biāo)本eIF4E中表達陽性率分別是0(0/10),22.7%(5/22),67.7%(16/24),87%(20/23),除了CINⅡ/Ⅲ和浸潤癌組的eIF4E陽性

7、表達差別無顯著性外(x2檢驗,P＞0.05),其余各組與宮頸鱗癌表達差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(x2檢驗,P＜0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.p16各外顯子在宮頸鱗癌中的基因改變既有擴增又有缺失。本實驗中由于病例數(shù)的限制,未能提供確切的證據(jù)表明p16各外顯子的擴增或缺失與p16蛋白表達的直接關(guān)系,還需進一步研究。
　　 2.81.3%病例(26/32)具有一個以上外顯子擴增或丟失,提示p16基因水平的改變與宮頸癌