膽囊癌細胞TGF-β1誘導后差異表達基因分析及FGFBP1、WISP2在膽囊癌中的表達研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一章膽囊癌細胞株上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)前后的差異基因表達分析
　　 目的:應(yīng)用基因芯片技術(shù)比較膽囊癌細胞株GBC-SD經(jīng)轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)誘導發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)前后的差異基因表達，為進一步探討膽囊癌侵襲轉(zhuǎn)移機制提供實驗依據(jù)。
　　 方法:培養(yǎng)膽囊癌細胞株GBC-SD，選取TGF-β1濃度分別為0ng/ml、0.5 ng/ml、5ng/ml、10ng/ml，誘導48h或72h后提取各組細胞總RN

2、A，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測上皮（鈣粘素CDH1）及間質(zhì)（波形蛋白VIM）標志物，然后選取EMT發(fā)生最理想的一組細胞。提取該組細胞及未經(jīng)誘導的膽囊癌細胞株GBC-SD的總RNA，純化后進行熒光標記，在含有21522個Oligo DNA的晶芯(○R)人基因組寡核苷酸芯片上進行雜交，用LuxScan10KA雙通道激光掃描儀進行掃描，根據(jù)熒光強度篩選出兩者的差異基因，最后用在線分子注釋系統(tǒng)(MAS2.0)進行生物信息學分析。

3、　　 結(jié)果:成功地進行了基因芯片實驗，共篩選出265個差異表達基因，167個基因在經(jīng)TGF-β1誘導后的膽囊癌細胞中表達上調(diào)，98個基因表達下調(diào)，將這些基因進行GO分類，發(fā)現(xiàn)其功能主要涉及細胞周期，有絲分裂，DNA復制等;信號通路分析則顯示主要涉及細胞周期信號通路，細胞粘附分子信號通路，p53通路，MAPK通路等。
　　 結(jié)論:利用TGF-β1對膽囊癌細胞進行誘導后，細胞發(fā)生了EMT;通過基因芯片檢測TGF-β1誘導前后膽囊癌

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