RNA激活上調(diào)膽囊癌細(xì)胞p21WAF1-CIP1基因表達(dá)的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：在膽囊癌細(xì)胞系GBC-SD中利用RNA激活技術(shù)上調(diào)人膽囊癌細(xì)胞（GBC-SD）中p21基因的表達(dá)，觀察其對(duì)GBS-SD細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力的影響。探討將p21基因作為膽囊癌靶向治療分子的可能性及其機(jī)制，為膽囊癌的基因治療提供一定的理論基礎(chǔ)和試驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：將與p21基因啟動(dòng)子DNA序列互補(bǔ)的雙鏈RNA分子dsp21-322及陰性對(duì)照片段dsControl分別轉(zhuǎn)染入人膽囊癌細(xì)胞株GBC-SD中，空白對(duì)照組只加入脂質(zhì)體

2、，分別采用RT-PCR法和Western blot分別檢測(cè)三組p21WAF1/CIP1基因mRNA及蛋白的表達(dá)情況；采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性；用Transwell小室法檢測(cè)RNAa后細(xì)胞侵襲、遷移能力的變化。
　　結(jié)果：dsRNA轉(zhuǎn)染GBC-SD細(xì)胞72h后，RT-PCR及Western blot結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組dsp21-322能有效上調(diào)GBC-SD細(xì)胞p21基因的表達(dá)，可以使其表達(dá)量增加到2倍

3、左右。MTT法顯示實(shí)驗(yàn)組GBC-SD的生長(zhǎng)抑制較陰性對(duì)照組明顯，在第2~5天四個(gè)時(shí)間點(diǎn)上實(shí)驗(yàn)組的存活率分別為74.1％、51.3%、44.8%、39.6%，與陰性對(duì)照組相比都有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。Transwell侵襲及遷移實(shí)驗(yàn)顯示：實(shí)驗(yàn)組 dsp21-322作用于膽囊癌細(xì)胞72h后，穿透至膜下表面的細(xì)胞數(shù)均低于空白組和對(duì)照組的細(xì)胞數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：1、dsp21-322轉(zhuǎn)染GBC-SD細(xì)胞7