TRAIL誘導乙型肝炎細胞凋亡及差異蛋白質組學研究.pdf

1、研究背景: 乙型肝炎病毒(HBV)感染是我國最為常見的疾病之一，我國約有1.2億人攜帶乙肝病毒，其中慢性乙肝病人3000萬，約10％-30％病人可發(fā)展為肝硬化，部分病人病情繼續(xù)惡化為肝癌。 許多實驗表明HBV感染確能影響肝細胞凋亡機制的平衡狀態(tài)，對于HBV感染與細胞凋亡的關系研究，以往比較集中在Fas/FasL系統(tǒng)。腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL)能選擇性地殺傷多種腫瘤細胞，卻不會引起正常細胞凋亡，而且在病毒與

2、宿主細胞相互作用中也起重要作用。有關HBV感染與TRAIL系統(tǒng)的研究多集中于細胞表面TRAIL及其受體表達情況分析，關于TRAIL引發(fā)細胞凋亡過程等的研究不多。 目的: 本研究利用比較蛋白質組學技術，以HBV穩(wěn)定轉染的肝癌細胞株HepG2.2.15為實驗對象，研究在細胞凋亡誘導配體TRAIL作用下，該細胞株蛋白質組學意義上的改變。 方法: 應用MTT法，了解TRAIL對HepG2.2.15細胞的誘導效果；

3、應用瓊脂糖凝膠電泳、流式細胞術和Caspase-3酶活性分析TRAIL誘導HepG2.2.15細胞凋亡過程；運用比較蛋白質組學的研究方法，對HepG2.2.15細胞凋亡發(fā)生后質、量有明顯變化的蛋白質點進行比較和分析。 結果: 1．TRAIL(0.1gg/ml)作用于HepG2.2.15細胞株12h、24h、36h后，細胞死亡率分別為17.91％、41.26％、59.85％。 2．PI單染亞二倍體含量12h后為21

4、.8％，高于對照組的8.7％。 3．24h后DNA電泳200bp處出現(xiàn)特異性條帶。 4．6h后Caspase-3酶活性為對照組的4.76倍。 5．制備型雙向電泳，分離經(jīng)TRAIL誘導的細胞和對照組細胞，對蛋白質點用圖像分析軟件進行初步分析，兩組細胞的蛋白圖譜具有較好的相關性和可比性，選擇兩塊凝膠進行配對比較，分析表明：凋亡組中出現(xiàn)6個新斑點，34個斑點表達量顯著升高，30個斑點表達量顯著降低。 結論:通過