成年及幼年大鼠硬腦膜差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：幼年動(dòng)物具有很強(qiáng)的顱骨缺損自行修復(fù)能力，當(dāng)動(dòng)物進(jìn)入成年后這種能力很快消失。既往文獻(xiàn)報(bào)道硬腦膜在顱骨再生中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，其中幼年大鼠硬腦膜有一些獨(dú)特的特點(diǎn)與顱骨缺損自行修復(fù)相關(guān)。但顱骨缺損自行修復(fù)過(guò)程中的分子生物學(xué)機(jī)制并不完全清楚，并且目前沒(méi)有相關(guān)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究。 材料與方法：1、采用雙向電泳技術(shù)，對(duì)樣品的處理、上樣量、等電聚焦、SDS-PAGE電泳等步驟進(jìn)行優(yōu)化。2、應(yīng)用雙向電泳、質(zhì)譜及Western-blot技術(shù)篩選

2、并鑒定成年及幼年大鼠硬腦膜中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。3、對(duì)大鼠硬腦膜細(xì)胞原代培養(yǎng)，觀察硬腦膜細(xì)胞體外培養(yǎng)的細(xì)胞形念和細(xì)胞增殖活性；應(yīng)用透射電子顯微鏡，對(duì)硬腦膜細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察比較。 結(jié)果：1、獲得重復(fù)性和分辨率比較好的成年及幼年大鼠硬腦膜蛋白雙向電泳圖譜；2、比較成年及幼年大鼠硬腦膜蛋白雙向電泳圖譜，發(fā)現(xiàn)24個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)(豐度相差3倍以上)，鑒定出11個(gè)蛋白質(zhì)(均為首次報(bào)道)，其中幼年大鼠硬腦膜蛋白上調(diào)的有：Cytoskele

3、ton-associated protein 4，vimentin，type II keratin，β-actin，γ-actin，Apolipoprotein A-IV precursor,alpha-tropomyosin和TCTP1；成年大鼠硬腦膜蛋白上調(diào)的有：COMM domain containing 7，albumin和RAB5-interacting protein；3、Western-blot結(jié)果顯示在幼年大鼠硬腦膜vi

4、mentin，tropomyosin，β-actin和γ-actin水平分別是成年大鼠硬腦膜的3.2，2.4，3.6和2.2倍，這與雙向電泳/質(zhì)譜結(jié)果一致；4、在體外培養(yǎng)中，成年硬腦膜細(xì)胞于10～15天后呈貼壁生長(zhǎng)，25～30天出現(xiàn)細(xì)胞融合。幼年硬腦膜細(xì)胞于5～8天后呈貼壁生長(zhǎng)，12～15天出現(xiàn)細(xì)胞融合。5、成年大鼠硬腦膜細(xì)胞呈梭形，細(xì)胞核狹長(zhǎng)，細(xì)胞核質(zhì)比約為1：2.5～3，細(xì)胞器比較發(fā)達(dá)，膠原排列整齊、致密；幼年大鼠硬腦膜細(xì)胞呈橢圓形