機(jī)械應(yīng)力誘導(dǎo)血管重建的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、本文探討了機(jī)械應(yīng)力誘導(dǎo)血管重建的分子機(jī)制，對(duì)于深入了解心血管活動(dòng)和疾病發(fā)生的本質(zhì)以及心血管疾病的防治都具有重要的理論和臨床意義。 方法：①以自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)為高血壓動(dòng)物模型、Wistar-Kyoto大鼠(WKY)為正常對(duì)照，進(jìn)行雙向凝膠電泳(2-DE)、質(zhì)譜分析(MS)和生物信息學(xué)分析聯(lián)用的差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析；②應(yīng)用血管應(yīng)力培養(yǎng)模型，分別在正常切應(yīng)力(15dyn/cm<'2>)和低切應(yīng)力(5 dyn/cm<'2>)條件

2、下離體培養(yǎng)大鼠胸主動(dòng)脈；⑧應(yīng)用血管差異蛋白質(zhì)組學(xué)方法，分析正常切應(yīng)力和低切應(yīng)力條件下培養(yǎng)血管的蛋白質(zhì)譜差異；④對(duì)MS鑒定的感興趣蛋白質(zhì)Rho-GDI alpha，進(jìn)一步應(yīng)用Western blotting和Real-time PCR技術(shù)驗(yàn)證2-DE顯示的Rho-GDI alpha在不同切應(yīng)力條件下培養(yǎng)動(dòng)脈表達(dá)水平的變化；⑤應(yīng)用RNA干擾(RNAi)技術(shù)抑制培養(yǎng)VSMCs的Rho-GDI alpha表達(dá)，并應(yīng)用Transwell法、流式細(xì)

3、胞儀技術(shù)和免疫熒光結(jié)合激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)抑制Rho-GDI alpha表達(dá)后VSMCs的遷移能力、凋亡細(xì)胞比例和細(xì)胞骨架、粘著斑形成情況。 結(jié)果：①2-DE圖譜比對(duì)分析顯示，18周齡SHR和同周齡WKY之間共有50個(gè)表達(dá)水平有差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)，其中有18個(gè)點(diǎn)在6周齡WKY和SHR之間的變化趨勢(shì)與18周齡WKY和SHR之間的變化趨勢(shì)一致；其余32個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)作為質(zhì)譜分析的候選蛋白點(diǎn)(19個(gè)點(diǎn)在SHR高表達(dá)，13個(gè)點(diǎn)在WKY

4、高表達(dá))；②低切應(yīng)力條件下體外培養(yǎng)大鼠胸主動(dòng)脈的差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析顯示，正常切應(yīng)力組和低切應(yīng)力組培養(yǎng)血管共有78個(gè)差異表達(dá)的蛋A質(zhì)點(diǎn)，其中Rho-GDI alpha、actin、transgelin和receptor activity modifying protein 2得到MADIL-TOF MS鑒定；③Western blotting和Real-timePCR結(jié)果顯示，Rho-GDI alpha蛋A質(zhì)和mRNA表達(dá)水平在正常切應(yīng)力

5、組均高于低切應(yīng)力組，差異有顯著性(P<0.05)；④RNAi抑制培養(yǎng)VSMCs Rho-GDI alpha表達(dá)后，VSMCs遷移能力和凋亡比例均顯著增加(P<0.05)；⑤抑制培養(yǎng)VSMCs Rho-GDI alpha表達(dá)，能促進(jìn)VSMCs F-actin束狀排列的形成和粘著斑paxillin的聚集。 結(jié)論：①在6周齡WKY和SHR之間變化趨勢(shì)與18周齡WKY和SHR之間變化趨勢(shì)一致的18個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)可能與大鼠種系之間的遺傳差異有

6、關(guān)，其余32個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)可能參與了高血壓誘導(dǎo)的血管重建；②正常切應(yīng)力和低切應(yīng)力培養(yǎng)血管共有78個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，其中Rho-GDI alpha在低切應(yīng)力條件下培養(yǎng)血管的表達(dá)水平被明顯抑制；③VSMCs Rho-GDI alpha表達(dá)被抑制后，VSMCs遷移能力和凋亡比例均顯著增加，同時(shí)促進(jìn)了細(xì)胞骨架形成和粘著斑聚集。結(jié)果提示，低切應(yīng)力可能通過(guò)抑制Rho-GDI alpha在VSMCs的表達(dá)，促進(jìn)VSMCs遷移和凋亡，從而誘導(dǎo)血