白血病細(xì)胞凋亡的亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、細(xì)胞凋亡是多細(xì)胞生物消除有害細(xì)胞的重要生理機(jī)制。在過(guò)去二十年中，有關(guān)細(xì)胞凋亡的發(fā)生、發(fā)展及其分子調(diào)控機(jī)制的研究已經(jīng)取得了十分矚目的進(jìn)展。細(xì)胞凋亡的異常在許多疾病如腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、自身免疫性疾病等的發(fā)病學(xué)上具有重要作用。如腫瘤發(fā)生過(guò)程中，往往伴隨腫瘤細(xì)胞對(duì)來(lái)自機(jī)體免疫系統(tǒng)及細(xì)胞內(nèi)凋亡調(diào)控機(jī)制的抵抗。相應(yīng)地，凋亡誘導(dǎo)藥物已經(jīng)成為腫瘤治療的重要途徑之一。本課題組先前曾在《Blood》雜志報(bào)道納摩爾濃度的NSC606985(一種新型喜樹(shù)堿

2、衍生物)能夠通過(guò)剪切活化蛋白激酶C8(PKCδ)，以時(shí)間-劑量依賴方式誘導(dǎo)急性粒細(xì)胞系白血病(AML)細(xì)胞凋亡。期間也與美國(guó)CornellUniversity合作，發(fā)現(xiàn)該化合物能誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞凋亡。同時(shí)，本課題組進(jìn)一步利用白血病小鼠模型，證實(shí)了NSC606985在白血病小鼠的體內(nèi)治療效應(yīng)。 本研究以該活性化合物分子探針，開(kāi)展細(xì)胞凋亡相關(guān)的亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)研究。應(yīng)用經(jīng)典的雙向凝膠電泳-質(zhì)譜方法，分別比較NSC606985處理白血

3、病NB4細(xì)胞24小時(shí)前后細(xì)胞核、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細(xì)胞漿組分蛋白質(zhì)表達(dá)譜的差異。結(jié)果顯示在細(xì)胞核、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及細(xì)胞漿中分別發(fā)現(xiàn)96，38，38和41個(gè)差異蛋白點(diǎn)。總共213個(gè)差異點(diǎn)中，質(zhì)譜成功鑒定出189個(gè)差異點(diǎn)，為-90種獨(dú)立的蛋白質(zhì)，其中包括16種發(fā)生轉(zhuǎn)位的蛋白質(zhì)。這些蛋白根據(jù)其功能大致可分為代謝、DNA損傷修復(fù)和染色體裝配、轉(zhuǎn)錄和mRNA加工合成，修飾及蛋白降解、細(xì)胞骨架及膜轉(zhuǎn)運(yùn)、氧化應(yīng)激、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及其他等八大類。這些研究結(jié)果已

4、經(jīng)在《Journal of proteome research》上發(fā)表。在上述這些差異蛋白中，我們證實(shí)存在于胞漿中的酸性亮氨酸磷酸核蛋白32B(ANP32B)在caspase-3活化之后被剪切。進(jìn)一步研究顯示，ANP32B蛋白的剪切是凋亡過(guò)程中發(fā)生的普遍現(xiàn)象。在此基礎(chǔ)上，利用體外實(shí)驗(yàn)結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)發(fā)現(xiàn)ANP32B是重要的凋亡誘導(dǎo)蛋白caspase-3的直接底物。通過(guò)定點(diǎn)致突變的方法識(shí)別出AEVD163為ANP32B序列上caspase-3