萊克多巴胺人工抗原的制備及鑒定.pdf

1、萊克多巴胺(Ractopamine，RAC)是一種苯酚胺類(lèi)β2腎上腺素受體激動(dòng)劑，與“瘦肉精”鹽酸克倫特羅一樣具有促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)再分配和生長(zhǎng)的作用，因此被用作新型添加劑促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)。由于萊克多巴胺具有在動(dòng)物體內(nèi)蓄積殘留的特性，食用萊克多巴胺添加劑飼養(yǎng)的動(dòng)物會(huì)引起人們不同程度的中毒反應(yīng)，具體表現(xiàn)為骨骼肌收縮增加，引起肌肉震顫。在我國(guó)已經(jīng)禁止其生產(chǎn)和銷(xiāo)售，但是非法使用的現(xiàn)象仍時(shí)有發(fā)生。目前，越來(lái)越多的分析方法被用于檢測(cè)RAC殘留，例如利用酶聯(lián)免疫

2、吸附測(cè)定法(ELISA)對(duì)RAC殘留進(jìn)行初步篩查，再通過(guò)質(zhì)譜或者色譜進(jìn)行確認(rèn)。與色譜法、質(zhì)譜法、生物傳感器法等藥物殘留檢測(cè)方法相比，免疫學(xué)分析方法不需要昂貴的儀器，具有操作簡(jiǎn)單和可以進(jìn)行高通量檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)，在RAC殘留檢測(cè)中發(fā)展迅速并已得到廣泛的應(yīng)用。
　　本研究通過(guò)三種不同的制備方法獲得萊克多巴胺人工抗原。其中采用1，4-丁二醚法（Linker法）制備RAC人工抗原，并把此方法制備的RAC-OVA作為包被原;此外，利用混合酸酐法制

3、備RAC人工抗原，最終獲得偶聯(lián)比分別為8∶1，17∶1，23∶1的RAC-BSA人工抗原;另外，本研究首次利用N'N-羰基二咪唑法一步制備RAC人工抗原，采用不同的溶劑得到濃度和偶聯(lián)比不同的RAC-BSA人工抗原。
　　采用物理學(xué)的方法（紫外光譜掃描和SDS-PAGE凝膠電泳）以及免疫學(xué)的方法(間接ELISA)鑒定人工抗原是否偶聯(lián)成功。
　　本研究利用三種不同制備方案成功獲得RAC人工抗原，并首次利用N'N-羰基二咪唑法成功