FOXP3、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、TLR2和TLR9在兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥發(fā)病中的作用.pdf

1、目的：本研究旨在探討CD4+CD25+Treg(CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,CD4+CD25+ regulatory T cells)及其轉(zhuǎn)錄因子FOXP3在兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥( Infectious mononucleosis IM)發(fā)病中的作用，觀察TLR2(Toll-like receptor2)和TLR9(Toll-like receptor9)在傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞上的表達(dá)以及血漿白細(xì)胞介素-2(

2、Interleukin-2,IL-2)、白細(xì)胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)、γ干擾素(Interferon-γ,IFN-γ)水平,為IM的免疫治療方案提供理論依據(jù)及新策略。方法：研究對(duì)象為本院(四川省人民醫(yī)院)兒科2010年2月至2011年2月收治的急性期IM患兒35例(IM急性期組),IM恢復(fù)期組35例(經(jīng)治療臨床癥

3、狀體征完全消失,病程一月時(shí))以及健康對(duì)照兒童35例(對(duì)照組)。1、運(yùn)用SYBR Green熒光定量PCR方法,檢測(cè)我院兒科診治的35例IM急性期組患兒、IM恢復(fù)期組患兒、35例健康對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)FOXP3mRNA、TLR2 mRNA、TLR9 mRNA的表達(dá)水平,目標(biāo)基因的相對(duì)表達(dá)分析采用參照基因的△CT法,即(2(referenceCT–targe

4、tCT))。2、所有標(biāo)本的血漿中的細(xì)胞因子水平分別運(yùn)用液相芯片技術(shù)和雙抗體夾心法檢測(cè)。3、外周血中本實(shí)驗(yàn)所需要檢測(cè)的T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)率采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析,采用one-way ANOVA比較IM急性期組、IM恢復(fù)期組、對(duì)照組間的差異,P﹤0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1、IM急性期組兒童PBMC中TLR2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平(4.03±0.56)顯著高于空白對(duì)照組兒童相對(duì)表達(dá)水平(

5、2.22±0.57)(P﹤0.01),IM恢復(fù)期組PBMC中TLR2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平(2.76±0.83)顯著低于IM急性期組兒童相對(duì)表達(dá)水平(4.03±0.56)(P﹤0.01);2、IM急性期組兒童PBMC中TLR9 mRNA相對(duì)表達(dá)水平(8.88±1.56)顯著高于對(duì)照組兒童TLR9 mRNA相對(duì)表達(dá)水平(3.63±1.30)(P﹤0.01),IM恢復(fù)期組PBMC中TLR9 mRNA相對(duì)表達(dá)水平(5.34±1.60)顯著低于

6、IM急性組兒童相對(duì)表達(dá)水平(8.88±1.56)(P﹤0.01)。3、IM急性期組兒童PBMC中FOXP3mRNA相對(duì)表達(dá)水平(2.82±0.90)顯著低于對(duì)照組兒童相對(duì)表達(dá)水平(4.65±1.23)(P﹤0.01),IM恢復(fù)期組PBMC中FOXP3mRNA相對(duì)表達(dá)水平(4.11±1.37)與對(duì)照組兒童相對(duì)表達(dá)水平(4.65±1.23)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。4、IM急性期組兒童血漿細(xì)胞中的因子IL-2、IL-10的表達(dá)值分別

7、為:42.97±16.36pg/ml、39.84±3.95pg/ml,對(duì)照組兒童血漿中的細(xì)胞因子IL-2、IL-10的表達(dá)值分別為:84.02±28.67pg/ml、69.86±3.95 pg/ml。IM恢復(fù)期組兒童血漿細(xì)胞中的因子IL-2、IL-10的表達(dá)值分別為:58.85±19.42 pg/ml、53.34±5.21pg/ml。IM急性期組兒童較對(duì)照組兒童降低,IM恢復(fù)期組兒童較急性期組兒童升高,三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.

8、01)。IM急性期組兒童血漿中的細(xì)胞因子IFN-γ(108.82±14.34 pg/ml)、TGF-β1(488.15±117.5 pg/ml)的表達(dá)水平較對(duì)照組兒童IFN-γ(22.00±9.74 pg/ml)、TGF-β1(253.75±72.6 pg/ml)增高,IM恢復(fù)期組兒童血漿中的細(xì)胞因子IFN-γ(49.82±11.55 pg/ml)、TGF-β1(318.62±90.1pg/ml)的表達(dá)水平較IM急性期組兒童IFN-γ,

9、TGF-β1降低,三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.01)。5、IM急性期組兒童 CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+、CD4+CD25+測(cè)定結(jié)果分別為80.66±4.88％、16.53±5.55％、62.71±8.76％、0.26±0.12、2.38±1.32％,對(duì)照組兒童CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+、CD4+CD25+測(cè)定結(jié)果分別為63.04±5.51％、37.98±4

10、.20％、27.71±6.52％、1.37±0.45、7.85±1.97％,IM急性期組兒童與對(duì)照組兒童比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),IM恢復(fù)期組兒童CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+、測(cè)定結(jié)果分別為74.25±7.33％、29.89±6.03％、42.25±7.33％、0.71±0.19,與急性期組兒童比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),IM恢復(fù)期組兒童CD4+CD25+測(cè)定結(jié)果為6.81±1.8

11、4％,與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：1、IM急性期存在T細(xì)胞亞群的失衡,由此導(dǎo)致的免疫抑制功能不足可能是免疫失衡的重要原因之一,從CD4+CD25+Treg細(xì)胞角度及其調(diào)控的分子機(jī)制闡明IM免疫失蘅的發(fā)病機(jī)理之一;2、證明TLR2和TLR9參與IM發(fā)病,TLR2和TLR9對(duì)CD4+CD25+Treg可能存在調(diào)控作用;3、證明細(xì)胞因子參與了IM發(fā)病,從細(xì)胞因子角度認(rèn)識(shí)IM發(fā)病機(jī)制;4、為IM的免疫治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)及新策略