CD4+CD25+調節(jié)性T細胞特異標志物FOXP3在慢性乙型肝炎中的作用及其與TGF-β1的相關性.pdf

1、目的：目前認為CD4+CD25+調節(jié)性T細胞(Treg cell)是機體免疫系統(tǒng)維持免疫耐受的重要調節(jié)者，可能參與乙型肝炎病毒感染慢性化的過程。轉化生長因子-β1(TGF-β1)是目前已知的最重要的致纖維化因子，它的激活介導了多種組織纖維化的產(chǎn)生，同時其作為一種重要的免疫抑制因子在免疫調節(jié)方面發(fā)揮重要的免疫抑制的作用。本課題通過觀察慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血單個核細胞中FOXP3 mRNA和血清TGF-β1的表達水平，以及FOXP

2、3和TGF-β1蛋白在活檢肝組織中的表達及定位情況，分析二者與病理炎癥活動度、肝纖維化分期、轉氨酶、病毒載量等指標的關系，并分析FOXP3和TGF-β1之間相關性。進一步探討CD4+CD25+調節(jié)性T細胞在CHB中的特性及作用機制，從而為CHB免疫耐受建立的主動調節(jié)機制提供有力證明，并為研究慢性乙型肝炎發(fā)病機制和治療方法提供理論依據(jù)。
　　方法：⑴病例選擇：入選120例病例均為慢性乙型肝炎患者，其中男86例，女34例，年齡16～6

3、9歲，平均年齡35.8±14.3歲。所有患者血清學指標均HBsAg陽性，HBeAg或抗-HBe陽性，HBV DNA陽性或陰性。診斷符合2005年中華醫(yī)學會肝病學分會、感染病學分會制定的《慢性乙型肝炎防治指南》標準[4]。以炎癥活動度分級(G)進行分組，其中G1組30例，G2組33例，G3組29例，G4組28例；設立正常對照組(G0)16例，正常肝組織來源于肝血管瘤術后。入選病例都排除甲、丙、丁、戊型病毒性肝炎重疊感染，排除藥物性肝炎、自

4、身免疫性肝病、脂肪肝、酒精性肝病等其它肝病。入選病例無肝穿活檢禁忌、血小板計數(shù)均>70×109，凝血酶原活動度＞60％。⑵實驗方法：于肝穿刺活檢前兩日，抽取患者空腹靜脈血，進行乙肝五項、肝功能、HBVDNA定量、凝血酶原活動度(PTA)、TGF-β1檢測。同時收集肝穿患者外周EDTA抗凝血2ml，淋巴細胞分離液分離單個核細胞，提取單個核細胞的RNA，進行逆轉錄cDNA，real-time PCR技術擴增檢測FOXP3mRNA。所選病例均

5、進行肝臟活體組織穿刺檢查，分別進行HE、Masson、網(wǎng)織纖維染色，并進行炎癥活動度分級(G)和纖維化分期(S)；免疫組織化學染色，檢測不同炎癥活動度分級及纖維化分期患者外周血單個核細胞及肝組織中FOXP3及TGF-β1的表達變化及定位特點。應用SPSS13.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。
　　結果：①FOXP3在不同炎癥分級的表達變化：G0級，F(xiàn)OXP3不表達或僅見于個別散在于匯管區(qū)及肝竇內(nèi)的淋巴細胞表達；G1和G2級，肝組織匯管

6、區(qū)可見到少量至中等量FOXP3陽性表達的淋巴細胞浸潤；G3和G4級，在肝組織匯管區(qū)可見到中等量至大量FOXP3陽性表達的淋巴細胞浸潤。②TGF-β1在不同炎癥分級的表達變化：G0期未見明顯染色陽性物質，極小部分偶在肝竇間隙可見陽性物質；G1、G2期染色陽性物質主要分布于肝血竇壁及竇周細胞，炎癥壞死灶及匯管區(qū)；G3、G4期在纖維間隔和肝細胞中均有分布，且著色深；G4期肝細胞、炎癥壞死區(qū)內(nèi)染色陽性物質尤為顯著。③不同病理分級CHB外周血單個

7、核細胞中FOXP3 mRNA水平均高于正常對照組(G0)(P＜0.05)，隨著炎癥活動度的逐漸增加，F(xiàn)OXP3 mRNA表達水平逐漸增強，與炎癥活動度呈正相關(r＝0.811，P＜0.05)。④不同病理分級CHB外周血單個核細胞中TGF-β1表達水平均高于正常對照組(G0)(P＜0.05)，隨著炎癥活動度的逐漸增加，TGF-β1表達水平逐漸增強，與炎癥活動度呈正相關(r=0.769，P＜0.05)。⑤不同纖維化分期CHB外周血單個核細胞

8、中FOXP3 mRNA表達水平均高于正常對照組(S0期)(P＜0.05)，F(xiàn)OXP3 mRNA表達水平與纖維化程度無相關性(r=0.228，P＞0.05)。⑥不同纖維化分期CHB外周血單個核細胞中TGF-β1表達水平均高于正常對照組(S0期)(P＜0.05)，隨著纖維化分期逐漸增加，TGF-β1表達水平逐漸增強，與纖維化程度呈正相關(r＝0.704，P＜0.05)。⑦不同病理分級CHB肝組織中FOXP3評分均高于正常對照組(G0組)(P

9、＜0.05)，隨著炎癥活動度的逐漸增加，F(xiàn)OXP3評分逐漸增強，與炎癥活動度呈正相關(r=0.866，P＜0.05)。⑧不同病理分級CHB肝組織中TGF-β1評分均高于正常對照組(G0組)(P＜0.05)，隨著炎癥活動度的逐漸增加，TGF-β1評分逐漸增強，與炎癥活動度呈正相關(r＝0.841，P＜0.05)。⑨不同纖維化分期CHB肝組織中FOXP3評分均高于正常對照組(S0組)(P＜0.05)，F(xiàn)OXP3評分與纖維化程度無相關性(r＝

10、0.312，P＞0.05)。⑩在肝組織中的FOXP3表達與ALT、HBV DNA定量之間無相關性。
　　結論：⑴CHB患者外周血單個核細胞及肝臟中Foxp3的表達隨著炎癥活動度的逐漸增加表達也逐漸增強，尤其以匯管區(qū)的表達更為顯著，與炎癥活動度之間呈正相關。肝臟炎癥的存在是促進FOXP3分泌表達的必要條件。FOXP3可作為判斷乙型肝炎的病情和預后的指標之一，但以肝組織中FOXP3表達更能客觀反映炎癥活動程度。⑵CHB患者血清及肝組織