電針對手術(shù)創(chuàng)傷大鼠心血管功能的影響及其機制分析.pdf

1、研究背景:外科手術(shù)創(chuàng)傷作為一種高強度的應(yīng)激源，可引起機體心血管、呼吸等多系統(tǒng)生理功能的改變，以致影響手術(shù)的安全性，也可影響術(shù)后患者的轉(zhuǎn)歸。因此，尋找合適的方法減輕外科手術(shù)創(chuàng)傷應(yīng)激反應(yīng)和降低術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生率，對促進患者術(shù)后恢復(fù)是很必要的。近年來，國內(nèi)外研究針刺穴位治療心臟疾病的實驗表明，針刺對心功能有積極的調(diào)整作用。電針在治療手術(shù)創(chuàng)傷應(yīng)激引起的心血管反應(yīng)中能否起到積極的防御及保護作用，目前沒有相關(guān)的報道。有文獻報道針刺治療心血管疾病的機

2、理，主要在于針刺可以調(diào)節(jié)自主神經(jīng)系統(tǒng)的異?；顒?，而調(diào)節(jié)自主神經(jīng)系統(tǒng)功能的關(guān)鍵中樞在下丘腦室旁核(paraventricular nucleus，PVN)和延髓頭端腹外側(cè)區(qū)(rostral ventrolateral medulla，RVLM)。Apelin是一種新型的具有心血管保護作用的內(nèi)源性多肽，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)也有分布。但是，電針治療手術(shù)創(chuàng)傷應(yīng)激引起的心血管反應(yīng)是否與PVN和RVLM有關(guān)，以及中樞作用的神經(jīng)遞質(zhì)或調(diào)質(zhì)是否有Apelin

3、或者相關(guān)氨基酸的參與，目前仍不清楚。
　　目的:本課題擬建立大鼠外科開胸手術(shù)創(chuàng)傷模型，觀察外科開胸手術(shù)創(chuàng)傷對心血管功能的影響，再觀察電針雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴對外科手術(shù)創(chuàng)傷引起的心血管反應(yīng)是否有積極調(diào)整作用，并進一步從形態(tài)和功能學(xué)的角度，觀察正常對照組、手術(shù)創(chuàng)傷組和創(chuàng)傷+電針組大鼠下丘腦PVN和RVLM c-Fos的表達，及各組PVN神經(jīng)元的電生理特性，以分析電針對手術(shù)創(chuàng)傷大鼠的心血管作用是否與中樞核團PVN、RVLM有關(guān)，以及檢測各組大鼠P

4、VN區(qū)Apelin及其受體APJR的表達情況和RVLM區(qū)氨基酸遞質(zhì)的釋放情況，更深入分析電針對手術(shù)創(chuàng)傷大鼠心血管功能影響的中樞神經(jīng)遞質(zhì)或調(diào)質(zhì)機制。
　　方法:模擬外科開胸手術(shù)，將大鼠麻醉后，接呼吸機機械通氣，打開胸腔并持續(xù)暴露60 min后，依次縫合關(guān)閉胸腔，撤離呼吸機，建立成年大鼠手術(shù)創(chuàng)傷模型。針刺采用大鼠雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴位，針刺對照采用雙側(cè)列缺穴位，同步監(jiān)測心率(HR)、血壓(BP)和心室內(nèi)壓(IVP)，觀察創(chuàng)傷對心功能各項指標(biāo)的影

5、響以及電針后手術(shù)創(chuàng)傷大鼠的心功能指標(biāo)的變化。采用免疫組織化學(xué)(IHC)方法檢測各組（對照組、創(chuàng)傷組、創(chuàng)傷+電針內(nèi)關(guān)組、創(chuàng)傷+電針列缺組）大鼠下丘腦PVN和RVLM c-Fos的表達;采用下丘腦腦片細(xì)胞內(nèi)記錄技術(shù)觀察各組大鼠PVN神經(jīng)元電生理特性的差異;采用熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real time-PCR)觀察下丘腦PVN Apelin及其APJR在電針調(diào)節(jié)手術(shù)創(chuàng)傷大鼠心血管功能中的作用;采用微透析結(jié)合高效液相色譜熒光檢測技術(shù)(HPLC

6、-FD)，觀察各組大鼠RVLM區(qū)氨基酸遞質(zhì)釋放的改變。
　　結(jié)果:
　　1.心功能參數(shù)檢測顯示:開胸手術(shù)術(shù)后60 min時心率(HR)、平均動脈壓(MAP)、左室壓力最大上升速率（+dP/dtmax）、左室壓力最大下降速率(-dP/dtmax)、心力環(huán)總面積(L0)均較術(shù)前顯著降低(P＜0.05或P＜0.01，n=7)。術(shù)后120 min時心率(HR)和左室壓力最大下降速率(-dP/dtmax)(P＜0.05或P＜0.01，

7、n=7)仍降低顯著。在開胸手術(shù)的同時電針手術(shù)創(chuàng)傷大鼠雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴后，除術(shù)后60 min時HR的降低較明顯(P＜0.05，n=6)外，其他心功能參數(shù)與術(shù)前相比變化不顯著(P＞0.05，n=6)。而電針雙側(cè)列缺穴卻不能改善手術(shù)創(chuàng)傷造成的心功能的減弱，其術(shù)后60 min、120 min時，HR、MAP、+dP/dtmax、-dP/dtmax和L0均顯著降低(P＜0.05或P＜0.01，n=6)，并且術(shù)后120 min時LVEDP(P＜0.05，

8、n=6)還顯著升高。
　　創(chuàng)傷+電針內(nèi)關(guān)組的HR、MAP、LVEDP、+dP/dtmax(P＜0.05)、-dP/dtmax和L0的術(shù)前術(shù)后變化率明顯小于創(chuàng)傷組，而創(chuàng)傷+電針列缺組的HR、MAP、LVEDP、-dP/dtmax和L0的術(shù)前術(shù)后變化率與創(chuàng)傷組相比無顯著差異，甚至+dP/dtmax的變化率還明顯增高（P＜0.05）。
　　2.免疫組化觀察表明:在術(shù)后60 min時，創(chuàng)傷組大鼠PVN和RVLM區(qū)的c-Fos表達均較

9、正常組有明顯升高(P＜0.05);而創(chuàng)傷+電針內(nèi)關(guān)組的PVN和RVLM區(qū)的c-Fos表達卻出現(xiàn)下降趨勢，其中RVLM區(qū)Fos陽性神經(jīng)元的數(shù)目下降具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);但創(chuàng)傷+電針列缺組的PVN和RVLM區(qū)c-Fos表達并沒有出現(xiàn)明顯下降趨勢，與對照組比較，該組PVN區(qū)的Fos陽性神經(jīng)元還明顯升高（P＜0.01）。在術(shù)后120 min時，創(chuàng)傷組的Fos陽性神經(jīng)元仍多于對照組，而創(chuàng)傷+電針內(nèi)關(guān)組的Fos陽性神經(jīng)元較創(chuàng)傷組則有降低的

10、趨勢。
　　3.PVN神經(jīng)元細(xì)胞電生理分析表明:與正常組比較，創(chuàng)傷組的神經(jīng)元誘發(fā)動作電位所需最小胞內(nèi)刺激電流的強度(rheobase)顯著減小(P＜0.01)，膜斜率電阻(membrane resistance，Rm)明顯增大(P＜0.01)，其他基本電生理參數(shù)均無明顯改變。創(chuàng)傷+電針內(nèi)關(guān)組大鼠的PVN神經(jīng)元誘發(fā)動作電位所需最小胞內(nèi)刺激電流的強度反而有所增大，膜斜率電阻又有所減小，動作電位的最大上升斜率明顯低于創(chuàng)傷組（P＜0.05

11、），其它參數(shù)與創(chuàng)傷組相比無顯著性變化。在穹隆附近用同芯雙極電極進行局部電刺激，細(xì)胞內(nèi)記錄PVN神經(jīng)元的突觸后電位，在正常組記錄到的16個細(xì)胞中，可有69％(11/16)的細(xì)胞能誘發(fā)EPSP(excitatorypostsynaptic potential)，6％(1/16)的細(xì)胞可誘發(fā)IPSP(inhibitory postsynapticpotential)。而在創(chuàng)傷組記錄到的10個細(xì)胞中，只在10％(1/10)誘導(dǎo)出EPSP，突觸反

12、應(yīng)誘導(dǎo)率明顯降低(P＜0.01)。在電針內(nèi)關(guān)組大鼠PVN腦片記錄到的8個細(xì)胞中，卻有50％(4/8)的細(xì)胞給予局部電刺激后能誘發(fā)EPSP，突觸反應(yīng)誘導(dǎo)率又有所升高。
　　4.各組大鼠PVN區(qū)Apelin mRNA及其受體APJR mRNA的表達結(jié)果顯示:與對照組相比，創(chuàng)傷組大鼠Apelin mRNA及其APJR mRNA的表達均有所減少，電針內(nèi)關(guān)穴以后，兩者的mRNA水平又有所提高。
　　5.各組大鼠RVLM區(qū)氨基酸遞質(zhì)檢測

13、結(jié)果表明:術(shù)后120 min時創(chuàng)傷組抑制性氨基酸?；撬釢舛让黠@高于正常對照組(P＜0.05，n=5)，手術(shù)創(chuàng)傷+電針內(nèi)關(guān)組的?；撬釁s有所下降。術(shù)后60 min時，創(chuàng)傷組的?；撬嵋灿性龆嗟内厔荩娽樢院?，也有下降的趨勢。在術(shù)后60 min和120 min時，各組興奮性氨基酸谷氨酸變化沒有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:外科手術(shù)創(chuàng)傷能顯著減弱心功能。電針內(nèi)關(guān)穴能穴位特異性改善手術(shù)創(chuàng)傷大鼠的心功能。電針內(nèi)關(guān)穴改善手術(shù)創(chuàng)傷大鼠心功能的作用機制與中