UL-16結合蛋白(ULBP3)的表達及對癌癥病人NK細胞殺傷活性的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的:
　　人類巨細胞病毒糖蛋白UL-16結合蛋白-3(ULBP3)是最近發(fā)現(xiàn)的NK細胞表面重要活化性受體NKG2D的配體，在受多種病毒感染后的組織細胞或惡性腫瘤細胞表面都可表達上調(diào)，是一種重要的壓力誘導蛋白。本課題旨在研究ULBP3在腫瘤中的表達以及對NK細胞殺傷活性的調(diào)節(jié)作用。
　　方法:
　　1.ULBP3在腫瘤中的表達:采用流式檢測腫瘤組織和腫瘤細胞株膜表面ULBP3的表達;采用時間分辨熒光免疫分析檢測游離型U

2、LBP3(sULBP3)在腫瘤細胞株培養(yǎng)上清和腫瘤病人血清中的含量;采用免疫組化檢測腫瘤病人組織中ULBP3的表達;采用PCR方法檢測腫瘤細胞株和腫瘤組織中ULBP3基因的含量。
　　2.NK細胞毒性檢測試驗:采用LDH釋放實驗檢測不同濃度sULBP3蛋白(ULBP3-Fc)和不同表達量的膜型ULBP3分別處理對NK細胞殺傷活性的影響，以及ULBP3單克隆抗體對其調(diào)節(jié)作用。
　　3.流式檢測不同濃度sULBP3處理后對NK細

3、胞表面表達NKG2D的影響。
　　4.流式檢測腫瘤組織浸潤NK細胞數(shù)量與ULBP3表達的相關關系。
　　結果:
　　1.ULBP3不同程度的表達在結腸癌細胞株CD133-SW620和CD133+SW620以及肝癌細胞株7721細胞膜表面，而不表達在食管癌ECA109、肺癌A549、紅白血病K562細胞株細胞膜表面;并且在腸癌、肝癌、肺癌和胃癌組織中ULBP3表達明顯高于癌旁組織。sULBP3普遍存在于胃癌、腸癌、肺癌病

4、人血清中，明顯高于健康對照組(P＜0.001);sULBP存在于結腸癌細胞株CD133-SW620、CD133+SW620、肝癌細胞株7721培養(yǎng)上清液中，但不存在于肺癌A549、紅白血病K562、食管癌ECA109細胞株以及靜息和活化的NK細胞培養(yǎng)上清中。ULBP3 mRNA表達于CD133-SW620、CD133+SW620、7721細胞株和結腸癌組織中，而在K562、A549、ECA109和癌旁組織中均不表達。
　　2.膜型

5、ULBP3通過NKG2D途徑介導了NK細胞對靶細胞的識別和殺傷作用，并且NK細胞的殺傷活性隨腫瘤細胞表面ULBP3表達量的增多而增強。
　　3.低濃度sULBP3（＜15ng/ml）通過下調(diào)NKG2D的表達可以降低NK細胞對腫瘤細胞的殺傷活性，而高濃度的sULBP3(＞15ng/ml)對NK細胞的殺傷活性沒有影響。
　　4.腫瘤組織中NK細胞浸潤的數(shù)量與ULBP3的表達量成負相關關系。
　　5.ULBP3單克隆抗體通過